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(無題) 削除/引用 No.385-3 - 2007/10/25 (木) 14:58:31 - ねこたろう ABI310のシークエンシングに使用している試薬はどこのものをつかっておられますか？ ABIのbigdyeなら問題ないと思いますが、制御用のパソコンを当施設でも更新してから（mac→WinXP）以前使用していたアマルシャム（現在GE社）のものが使えなくなっています。ABI社およびGE社に問い合わせたところ新しくパソコンをバージョンアップしてからはGE社のものは使えなくなった、また、今後対応をする予定はありませんといわれました。当施設では仕方なくBigDyeに切り替えた経緯があります。このときTのみ読めなくなるという事態に陥りました。 シークエンシング試薬も確認した方が良いと思います。

(無題) 削除/引用 No.385-2 - 2007/10/25 (木) 00:58:23 - 銅鑼 シークエンスPCRのあとの精製方法はどれですか。 エタ沈だとフリーの塩基もある程度落ちてくるのか、まれに似たようなことになった経験があります。もしそうであれば手っ取り早い解決法はカラム精製だと思います。

シークエンス解析 削除/引用 No.385-1 - 2007/10/24 (水) 21:13:02 - ma 実験初心者でして分かりにくい質問であったなら申し訳ありません。大変初歩的な質問で恐縮です。 現在癌細胞を用いてシークエンスを行っています（ABI310）。PCRmixを作り、PCRをかけてDNAの増幅を確認して、その後PCR産物を100倍希釈してテンプレートDNAを作りプレミックス、プライマー、SDWを加えもう一度PCRをかけて、できたシークエンスPCR産物を精製しシークエンサーにかけ塩基配列を読み取る方法です。一回目のPCRではバンドは大変はっきりと見え増幅が確認できるのですが、シークエンサーで結果を見ると4色蛍光のうち、赤（T）のみほぼ真っ直ぐな波形でわずかにクネクネと山型をなしており、きれいな山型が出ません。他の3色についてはピークはそう高くはないのですが塩基配列は一応読み取れます。何度精製を念入りに行っても同じ結果で困っています。アドバイス頂ければ有難いです。

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