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No.384-TOPIC - 2007/10/24 (水) 19:20:45 - のい
PCR産物をアガロース電気泳動後ゲル抽して、それを再び増幅しようとしたところまったく増えません。そしてなぜかウェルの位置にバンドらしきものが見受けられます。なぜでしょうか?使っているポリメラーゼはTakara Ex-Taqです。
 
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(無題) 削除/引用
No.384-3 - 2007/10/25 (木) 10:37:24 - おお
まずはPCRの問題か、電気えいどうの問題かがこの記述では分かりませんね。えいどうでマーカー流していればえいどうに重大な問題があれば気がつくはずです。ゲルから切り出したあとちゃんと回収できているでしょうか?回収したDNAにアルコールなどが混じっていて酵素が聞かなかった可能せいもありますね。PCRは正常に働いていますか?やりなおすのなら今度はポジコンを入れましょう。

(無題) 削除/引用
No.384-2 - 2007/10/24 (水) 19:43:32 - ~
ゲルが古い
サンプルを載せすぎてゲルにうまく入らなかった
実は電圧がかかっていなかった
エチブロ染色の時間が短くて、ウェルに貯まったエチブロを見ている
抽出時にゴミを持ち込んでいて、そのために増えず、ゴミがウェルで見えた

1ngが10回増幅されると1ugになるというのを踏まえて再増幅のテンプレート量やサイクル数を決めていますか?

つんつんPCRをgoogle検索したことはありますか?

再現性はあるのですか?

増幅しない 削除/引用
No.384-1 - 2007/10/24 (水) 19:20:45 - のい
PCR産物をアガロース電気泳動後ゲル抽して、それを再び増幅しようとしたところまったく増えません。そしてなぜかウェルの位置にバンドらしきものが見受けられます。なぜでしょうか?使っているポリメラーゼはTakara Ex-Taqです。

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