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(無題) 削除/引用 No.370-5 - 2007/10/30 (火) 10:11:41 - tak searaさんコメント有難うございます。問題が発生しましたら改めてトピック立ち上げたいと思います。

ほぼ同じ 削除/引用 No.370-4 - 2007/10/29 (月) 23:08:53 - seara たいそんさんとほぼ同じですが １．脾臓由来細胞とリンパ節由来細胞 脾臓内には一過性のCD４発現もあるので由来は分けた方がいいと思います。 ２．MACSはpositive selectionで良いのか？(negative selectionすべきなのか？） 市販のビーズとか抗体だとするとCD４抗体はタイトレーションが結構強いのでpositive selection2回で細胞量は減りますが純度を気にしています。 ３．positive selectionで良い場合、MACSセパレーションの前に溶血処理は必須なのか？ だいたい大丈夫なのですが、脾臓の場合には溶血は必ずしています。 赤血球まじって巻き込みに入るのは嫌だし、ビーズつけるときにとれる予想細胞量じゃなく開始細胞数にたいして何マイクロ加えなさいと言うプロトコールですから邪魔なものがおおいと効率悪いかなとおまじない程度の気持ちで。 ４．論文ではCD3抗体は固相化が必要と明記してあるが、CD28抗体について曖昧な記述が多いですが、同様に固相化しておいて良いのか？ CD28抗体は液相で大丈夫ですが面倒くさいの予備実験で決めた濃度でのCD3＋CD28ミックスを作って固相化してます。固相化の方が接触率のコントロール効き易いですし。

(無題) 削除/引用 No.370-3 - 2007/10/23 (火) 14:39:33 - tak たいそんさんコメント有難うございます。 他の方の御意見もお聞かせ下さい。

(無題) 削除/引用 No.370-2 - 2007/10/23 (火) 13:01:53 - たいそん １　大差ないでしょう。表在リンパ節を使った方がMACSはきれいにいくでしょう。 ２　aCD3/aCD28刺激ならどちらでもよいと思います。 ３　溶血しないでやったことはありません。遠心も含めて５−６分で終わるのでやったらどうでしょうか？リンパ節なら必要ないですけど ４　CD28抗体はsolubleでも大丈夫です。

primary CD4+ cell 削除/引用 No.370-1 - 2007/10/23 (火) 00:38:36 - tak 免疫関連の実験は不慣れなので、注意すべき点を経験者から教えていただきたく掲示いたしました。 マウス脾臓あるいはリンパ節からMACS beadsを使用してCD4-positive細胞を単離し、初代培養条件下でCD3抗体＋CD28抗体刺激後の細胞増殖およびサイトカイン産生を測定しようとしています。 お聞きしたい点は以下です。 １．脾臓由来CD4+細胞とリンパ節由来CD4+細胞では、この手の実験を行う上で何か差異はあるのか？ ２．MACSはpositive selectionで良いのか？(negative selectionすべきなのか？） ３．positive selectionで良い場合、MACSセパレーションの前に溶血処理は必須なのか？ ４．論文ではCD3抗体は固相化が必要と明記してあるが、CD28抗体について曖昧な記述が多いですが、同様に固相化しておいて良いのか？ ご意見、宜しくお願いいたします。

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