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(無題) 削除/引用 No.350-3 - 2007/10/18 (木) 12:17:45 - FF ホルマリン固定サンプルからは生組織から取る方法ではDNA抽出は困難です。 学術的な話が出来なくて申し訳ないのですが簡単に言うと、ホルマリン固定はホルマリン固定だけあってDNAとProteinががっちり固定されてしまします。 それを切り離したりするのにProKを使用します。 また、パラフィン埋包サンプルからもキシレン処理→エタノール処理などの脱パラをしないといけないです。 また、DNAはホルマリン固定によりかなりばらばらになってしまうらしく300bpくらいのPCRくらいしが出来ないようです。 また、ホルマリン固定サンプルからDNA抽出する専用のKitもいくつが出ています。 普通のDNA抽出Kitのプロトコにも、ホルマリン固定サンプルの処理法が載っていたりします。 パラフィン切片→脱パラ→プロテアーゼ処理→フェノクロ抽出。 ネットで調べても結構いろいろ出てきます。

(無題) 削除/引用 No.350-2 - 2007/10/18 (木) 12:03:01 - ぽー ホルマリン固定後のパラフィン包埋ブロックの検体からだと、 脱パラフィンしないとＤＮＡの抽出は難しいと思います。 以前やっていた時は キシレン ３０分×２回 ↓ エタノール １０分×２回 ↓ 90%エタノール ５分×２回 ↓ 70%エタノール ５分×２回 ↓ H2O ５分×２回 ↓ Pro.K処理へ と言う感じでやっていました。 量が少ない時はいいのですが、量が多いと処理が煩雑になるので キシレンなどを用いなくてもできるkitも売っていたと思うので、 量が多い時などはそちらを検討された方がいいかもしれません

DNA抽出で困、困 削除/引用 No.350-1 - 2007/10/18 (木) 11:15:20 - 冨松　郁子 ルーチンには摘出臓器（一旦冷凍保管の後）から直接DNA抽出しています。が　ホルマリン固定後のブロック検体からは　今までと同じ方法ではほとんど抽出できませんでした。Pro.Kをかなり大量に使用？　検体をすりつぶす？　高温で長時間incubate? 　経験のある方お教え下さい。

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