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(無題) 削除/引用 No.310-4 - 2009/06/10 (水) 16:01:37 - tani まず、コントロールの組織を使って、全く同じ方法で染めてみて下さい。 筋細胞が何の動物種かわかりませんが、抗体を見ると、ラットの筋組織でも いけそうな気がしますので、そのあたりの動物の筋組織を摘出し、0.6% H2O2 in Me-OHと、一般的なホルマリン組織の両方で固定し、パラフイン切片にして、 その後の方法は、おばかちゃんさんのプロトコル通りにやってみて下さい。 デスミンは比較的一般的な抗体ですから、普通の方法でも染まります。 往々にして、方法は正しいけれど、培養細胞は平たく広がって生えてますから、 普通の組織切片の厚さよりずっと薄いので、染色はうまく行っているけれど、 見た目、シグナルがつかめない、という事もありますね。

buy valium 削除/引用 No.310-3 - 2009/06/07 (日) 18:22:56 - HsvsRsvsesv <a href="<http://groups.google.com/group/buy-best-generic-valium>">buy valium</a>

固定条件・抗体の質 削除/引用 No.310-2 - 2007/10/10 (水) 12:26:40 - taka 固定の種類によって抗体の反応性が異なるのは一般的によく知られています。メタノール固定でも染められる抗体なのでしょうか？抗体反応時間・温度も検討する必要があるかもしれません。 DAB発色ってpH7.4くらいで良かったでしょうか？ど忘れしましたが。 Dot blotに使用された抗原はピュアなdesminなのでしょうか？Dot blotなんて分子量もわからないですし、反応特異性もしっかりコントロールをとらないと判断できません。2次抗体だけでも発色時間長くしたら薄く染まってくる場合もあるのでは。 既に論文で確立されているdesmin染色方法を真似て、上手くいかないのでしょうか？

免疫染色について 削除/引用 No.310-1 - 2007/10/09 (火) 22:49:40 - おばかちゃん 超基礎的な質問ですが，お願いします． 初代培養で筋細胞を培養しています．確認の為にdesmin抗体を用いて染色を行いHRP標識の2次抗体，反応液としてDABを用いていますが，論文やwesternでみられるような赤褐色が得られません．このような場合どのような事が原因なのでしょうか？ dot blotで抗体がクロスしていることは確認済みです． 手順としては 1，PBSでの洗浄 2，0.6% H2O2 in Me-OHで固定(20 min) 3，PBSで洗浄 4，0.1% Triton，4% goat serum in PBS でブロッキング(20 min) 5，anti-desmin rabbit IgGでroom temp 1h 6，PBSで洗浄 7，anti-rabbit IgG HRP標識でroom temp 1h 8，PBSで洗浄 9，0.25% DAB in PBS で10 min 10，0.4% H2O2，0.25% DAB in PBSで10 min 未筆ながらお願いします．

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