現在16回膜貫通型タンパクを抽出し、westernにて発現量を見ようとしています。
抽出にはRIPA buffer (1%NP-40, 1%SDS, 1%sodium deoxycholate, 25mM Tris HCl. 150mM NaCl) を用いています。
細胞はCaco-2細胞で、プレートに接着した細胞にRIPA buffer を添加し、ピペッティングで回収した後、超音波、遠心、上清回収を行い抽出しています。
これで抽出したタンパクをSDS-PAGEに供しwesternにてある膜タンパクの発現を見たいのですがどうもバンドがでません。
抗体濃度などのwesternの条件検討を行ったのですが、どうも目的のタンパクが抽出されていないのではと思います。
このような16回膜貫通型タンパクを抽出するには、どのようにすればよいのでしょうか?
よろしくお願い致します。 |
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