Bio Technical フォーラム

  • 書き込みがかなり増えてしまいサーバーの負荷が大きくなったので、新しいBioTechnicalフォーラムに移行してください。
  • 新しいトピックは新フォーラムでのみ立ち上げ可能です。レスは2009年2月15日までつけられますが、その後は、つけられません。

トピック一覧 | 研究留学ネットに戻る

最新のフォーラム | このフォーラム(readのみ) | ひとつ前のフォーラム(readのみ)

このスレッドをはてなブックマークに追加このスレッドをはてなブックマークに追加

RNAが抽出されているか確認したいのですが・・・ トピック削除
No.285-TOPIC - 2007/10/04 (木) 16:26:12 - imu
はじめまして。
現在、組織(ヒト癌組織)のRNA抽出を行なっているところです。

以前の研究室でずっとやってきた方法と異なり、抽出操作自体はものすごく簡易でした。(ちなみに抽出キットはFUJIFILM(Life Science)のQuick Gene RNA tissue Kit SU)しかし、初めて行なう操作でしたし、頼まれてなので、うまくRNAが抽出されているか確認しようと思っています。

以前は吸光度測定で定量し、その後RT-PCR〜電気泳動を行なっていました。今回も吸光度をとって確認するつもりだったのですが、測定器が近くにない(今後購入予定はなし)そうで、他の方法がないか考えています。

データとしてRNAを保存をしておかなければならないそうで、この先PCR等を行なうことは限りなくゼロに近いそうです。抽出する組織も大量にありますし、実験操作がうまくいっているかだけでも確認をとりたいのですが、他に確認をとる方法はあるのでしょうか??

確認程度なので、出来るだけ簡易に出来るものをと考えています。
うまく説明できていないかもしれませんが、どうぞよろしくお願いします。
 
- このトピックにメッセージを投稿する -



3件 ( 1 〜 3 )  前 | 次  1/ 1. /1


(無題) 削除/引用
No.285-3 - 2007/10/05 (金) 12:26:30 - cris
解析しないのにRNA抽出するという状況がいまいち良く理解できませんが、
同じFUJIのキットを頻繁に使用していますので、少し書き込ましていただきます。

基本的にRNA抽出にまわす組織量をプロトコールの範囲内に納めて、記載されている手順通りにやればRNAが取れていないということはありませんでした。
ごくごく少量の組織片からでもかなり効率よく抽出することができる印象があります(組織の種類にもよるようで、脂肪が多い組織には弱い気がします。)。
ただ、組織量をプロトコール記載量よりも多くしてしまった場合(2倍とか3倍とか)、極端に抽出量が落ちます。そして、カラムが詰まります。

その辺だけを注意しておけば、基本的に取れないことはありません。2-メルカプト入れ忘れとか初歩的ミスをしていない自信があれば、取れていると思って良いのではないでしょうか?

ただ、個人的には泳動なりRTなりで確認すべきだと思いますが。

(無題) 削除/引用
No.285-2 - 2007/10/04 (木) 17:41:34 - h-iz
そのままアガロースで電気泳動しては如何でしょうか?
3本バンドが出ていればそれなり以上の質のRNAが取れている筈です。

RNAが抽出されているか確認したいのですが・・・ 削除/引用
No.285-1 - 2007/10/04 (木) 16:26:12 - imu
はじめまして。
現在、組織(ヒト癌組織)のRNA抽出を行なっているところです。

以前の研究室でずっとやってきた方法と異なり、抽出操作自体はものすごく簡易でした。(ちなみに抽出キットはFUJIFILM(Life Science)のQuick Gene RNA tissue Kit SU)しかし、初めて行なう操作でしたし、頼まれてなので、うまくRNAが抽出されているか確認しようと思っています。

以前は吸光度測定で定量し、その後RT-PCR〜電気泳動を行なっていました。今回も吸光度をとって確認するつもりだったのですが、測定器が近くにない(今後購入予定はなし)そうで、他の方法がないか考えています。

データとしてRNAを保存をしておかなければならないそうで、この先PCR等を行なうことは限りなくゼロに近いそうです。抽出する組織も大量にありますし、実験操作がうまくいっているかだけでも確認をとりたいのですが、他に確認をとる方法はあるのでしょうか??

確認程度なので、出来るだけ簡易に出来るものをと考えています。
うまく説明できていないかもしれませんが、どうぞよろしくお願いします。

3件 ( 1 〜 3 )  前 | 次  1/ 1. /1


パスワードを入力してチェックした記事を チェックした記事を