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(無題) 削除/引用 No.2797-6 - 2009/02/06 (金) 18:41:09 - ES初心者 いろいろな意見ありがとうございます。 系は昔の人が残していったプロトコルを守ってやっているつもりなのですが…。 やはりまずはESをチェックすべきでしょうか。 ESをもらってから10年近く経っているようなのですが、液体窒素の中でも悪くなっていくものなのでしょうか？ ただ、ESを起こしてすぐにアグリゲーションを行った所、最高でも70%程度のキメラしかできていません。ただ、通常がどれくらいかが分からないのでこれが悪いのか良いのかよく分からない状態です。 うまく行っているラボからESをもらうのは手っ取り早そうですね。手続きとかは普通の細胞と同じで良いかどうか調べてみます。

(無題) 削除/引用 No.2797-5 - 2009/02/06 (金) 13:08:44 - ＩＲＥＳ まずはESが問題ないか確認するべきですね。 でないとどこが悪いのか評価のしようがないと思います。 具体的には、一度新しいESを他の上手くいっているところから手に入れて 今の系で一通り行いキメラ率を見てみましょう。 これで問題があるようだと系の問題になるので一つ一つ見直していかなければなりません。 系の疑う場所はケースバイケースだと思います。疑うべき場所はESが触れるもの全て、器具洗浄に用いている水まで考えなければなりません。過去に上手くいっているプロトコールが存在するのであれば、完全に過去のものに戻した方が早いのではないかと思います。

(無題) 削除/引用 No.2797-4 - 2009/02/05 (木) 23:03:31 - おお 最近あなたのラボで扱っている遺伝子の性質も 考えないといけないかも、、、、 かんがえるステップは可也ありますね。 昔使っていたKO-ESとかWT ESを並行してやってみるとか。

(無題) 削除/引用 No.2797-3 - 2009/02/05 (木) 17:16:21 - りょう 体毛のキメラ具合だけで判断しない方が良いですよ。

(無題) 削除/引用 No.2797-2 - 2009/02/05 (木) 16:35:11 - 貞子 うーん、考えたくないでしょうけど、ESが悪くなってるとか。

高効率のキメラマウスが産まれない 削除/引用 No.2797-1 - 2009/02/04 (水) 17:45:09 - ES初心者 TT2 ES細胞を用いてノックアウトマウスを作成しています。 相同組み換えが起きたcloneは取れたのですが、キメラ率の高いマウスが生まれてきません。 どうも昔はうまくいっていたようなのですが、今はラボ全体としてうまくいっていないようです。 しかし、ステップが多すぎてどこから疑えばよいのか困っています。とりあえず、うまくいっていた時とFBSのLotやESのLotは変わっていないようです。 今回の話に限らなくても、このような点を改善したらうまくいくようになったなどの体験談がありましたら教えていただきたいと思います。 よろしくお願いします。

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