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PCRのテンプレートについて トピック削除
No.2796-TOPIC - 2009/02/04 (水) 14:45:36 - 大学院生
gDNAなどPCRがかかりにくいテンプレートを使用して、
非特異的バンドが何本が検出された場合に、予想されるサイズのバンドを切り出してDNAを精製し、それをテンプレートとして再度PCRをかけた場合には、大元のテンプレートよりはかかりやすい、または非特異的バンドが出にくいのでしょうか?
それと、得られたバンドは切り出したバンドそのものが増幅されたものと判断してもいいものでしょうか?
もちろん、予想される配列は分かっているので、シークエンスか制限酵素などで確認はしますが、
どうもgDNAから直接増幅したものと、間接的に増幅したものでは、意味合いが異なる気がしたので、質問しています。
もし、答えがいただけるようであれば参考にします。
 
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buy valium 削除/引用
No.2796-3 - 2009/06/07 (日) 02:17:22 - HsvsRsvsesv
<a href="<http://groups.google.com/group/buy-best-generic-valium>">buy valium</a>

(無題) 削除/引用
No.2796-2 - 2009/02/04 (水) 15:31:07 - ~
通常は、かかりやすくなりますし、非特異の増幅も減るでしょう。

>得られたバンドは切り出したバンドそのものが増幅されたものと判断してもいいものでしょうか?
サイズによっては、切り出したバンドの一部が増幅されているかもしれません。

ポイントは、切り出したものはコピー数が非常に多いので、
希釈するかサイクル数を減らさないとおかしな産物が出やすいことです。

切り出さなくても、電気泳動後のバンドをチップでつついて回収することも出来ます。
http://www.biology.tohoku.ac.jp/lab-www/cellbiol/kojinn/oba/1cell.html
そのくらいの量で十分にテンプレートとして使うことが出来ます。

PCRのテンプレートについて 削除/引用
No.2796-1 - 2009/02/04 (水) 14:45:36 - 大学院生
gDNAなどPCRがかかりにくいテンプレートを使用して、
非特異的バンドが何本が検出された場合に、予想されるサイズのバンドを切り出してDNAを精製し、それをテンプレートとして再度PCRをかけた場合には、大元のテンプレートよりはかかりやすい、または非特異的バンドが出にくいのでしょうか?
それと、得られたバンドは切り出したバンドそのものが増幅されたものと判断してもいいものでしょうか?
もちろん、予想される配列は分かっているので、シークエンスか制限酵素などで確認はしますが、
どうもgDNAから直接増幅したものと、間接的に増幅したものでは、意味合いが異なる気がしたので、質問しています。
もし、答えがいただけるようであれば参考にします。

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