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蛍光抗体二重染色の蛍光色素に関して トピック削除
No.2786-TOPIC - 2009/02/03 (火) 16:08:45 - タンパック
二次抗体がすでにconjugateされたもの(Alexa Fluor594とCy5)で免疫蛍光染色の二重染色を行おうとしています。
結果はAF594の方はよく染まって、Cy5はほとんど見えませんでした(パソコンモニター上でも)。
dilutionの問題は別として、お互いの蛍光色素の波長が近いのが原因ということはありえますか?
ちなみに顕微鏡はZeissの偏光顕微鏡(Axio Imager)です。
 
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うちの場合 削除/引用
No.2786-8 - 2010/02/17 (水) 11:52:53 - きりん
適切なフィルターを使えば分けられるかも知れませんが
594とCy5だとかぶるような気がしますが。
もっと離れたAlexa488とCy5とかで2重染色したほうがよいのでは?

(無題) 削除/引用
No.2786-7 - 2009/06/05 (金) 06:07:17 - 別件
興味があったのでお聞きしたいのですが、蛍光二重染色する際に標識抗体のおすすめの組み合わせは何でしょうか?

Cy5について 削除/引用
No.2786-6 - 2009/04/16 (木) 18:37:35 - たろう
Cy5とは何でしょうか?

(無題) 削除/引用
No.2786-5 - 2009/02/03 (火) 17:09:17 - pupi
うちのラボでは、水銀ランプの蛍光顕微鏡でCy5は検出できてます。
フィルターが適切なものなら検出できますよ。

(無題) 削除/引用
No.2786-4 - 2009/02/03 (火) 16:45:06 - Axio
偏光顕微鏡で蛍光像を見ておられるのですか?それとも蛍光顕微鏡の間違い?

蛍光顕微鏡だとして、水銀光でCy5は見たこと無いのですが、近赤外領域ではどれくらい出ているのでしょうか。確か、かなりマイナーだったような気がしますが。

(無題) 削除/引用
No.2786-3 - 2009/02/03 (火) 16:34:42 - pupi
色素の波長による2重染色での問題は無いと思います。

Cy5での単染色は染色出来ているのでしょうか?

単染色では検出できるのに、alexa fluor594との2重染色になると
検出できないとなると、機械的な問題な気がしますがどうでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.2786-2 - 2009/02/03 (火) 16:32:04 - ~
>お互いの蛍光色素の波長が近いのが原因ということはありえますか?
Cy5標識抗体だけで染めてみれば、分かるのでは?

蛍光抗体二重染色の蛍光色素に関して 削除/引用
No.2786-1 - 2009/02/03 (火) 16:08:45 - タンパック
二次抗体がすでにconjugateされたもの(Alexa Fluor594とCy5)で免疫蛍光染色の二重染色を行おうとしています。
結果はAF594の方はよく染まって、Cy5はほとんど見えませんでした(パソコンモニター上でも)。
dilutionの問題は別として、お互いの蛍光色素の波長が近いのが原因ということはありえますか?
ちなみに顕微鏡はZeissの偏光顕微鏡(Axio Imager)です。

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