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(無題) 削除/引用 No.278-3 - 2007/10/03 (水) 16:34:29 - ats 抗原・抗体はどうのような物をお使いでしょうか？ もう少し情報がないと想像でお答えするしかありません。Tagの抗体か、目的タンパクのmAbなのか、peptide抗体なのか、精製品なのか否か？ 抗体標品中のコンタミ抗体の可能性もありますし、非特異的バンドではなく分解産物の可能性もあります。抗体・検出法によっては使用に適さないブロッキング剤もあります。 また、抗体・抗原反応もタンパク・タンパク相互作用ですので、塩濃度・pH・温度などの影響を受けます。そのため、結合時のPBS(or NaCl)の濃度をやや上げたり下げたり、洗浄液にtweenのみではなく0.1-1%のtritonX-100を添加すると有効な場合があります。 でも、MNさんのご指摘のように抗体濃度を下げるのが、 first-choiceですね。 StrepTagIIの抗体なんか、PVDF膜では検出できなくて、ニトロセルロ−ス膜を使う必要がありました。

(無題) 削除/引用 No.278-2 - 2007/10/03 (水) 15:50:00 - MN 抗体の希釈を検討してみてはどうでしょうか？ 自分がやっていた時は、抗体の希釈を何段階かふって比較してみました。 二次抗体の希釈に関しては、不安でしたがダメもとで カタログのＭＡＸまで希釈を落としてやってみると バックが上がらず目的のバンドだけ検出できましたよ。 あとはＷａｓｈのときの温度を上げてみるのも 非特異を減らすのには有効でした。 がんばってください。

ウエスタンの非特異バンドの防ぎ方は？ 削除/引用 No.278-1 - 2007/10/03 (水) 15:37:52 - うえすたんたん ウエスタンブロット法で非特異的バンドが何本もでたり、目的バンドより非特異の方が強く出ることもあります。ブロッキングはブロックエースを使っています。抗体希釈はCan get signalを使うと前述のとおり、スキムミルクで希釈すると（５％）、ほとんどのバンドが検出できなくなり（目的も）、困っています。

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