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PCRについて
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No.2769-TOPIC - 2009/01/31 (土) 07:10:19 - 初心者
初心者です。どなたか教えていただけませんか。
PCRでネガティブコントロールの水にもポジティブバンドが出てしまうのですが、コンタミ以外に、何か理由は考えられるのでしょうか?30−35サイクルではポジコンよりは薄いのですが。
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No.2769-6 - 2009/02/01 (日) 02:54:53 - 初心者
ありがとうございます。
ピペットマンの可能性ですか。素人なもので、考えていませんでした。試薬は全部変えたのに、おかしいなあ、と悩んでいました。
まずは、ピペットマンチェックしてみます。
ありがとうございました。
追加
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No.2769-5 - 2009/01/31 (土) 14:05:46 - 22
あ、でもそっか。
ピッペトマンが汚染している可能性があるとすると
それを共通試薬に突っ込むのは、、、
注意した方が良いかも。
(無題)
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No.2769-4 - 2009/01/31 (土) 13:56:45 - 22
ネガコンの水とはなんのネガコンでしょうか?
普通に考えればDNA(template)でしょうけど。
加えるもの全てに対して「水」のコントロールを、
御自分のピペットマンを使う、
別のピペットマンを使う、
でやれば何かわかるかもしれませんね。
まぁやはり本命はピペットマンのコンタミでしょうね。
そもそもその「水」かもしれませんが。
でももしかしたら共通試薬かもしれませんし。
組み合わせとしては10?位でしょうか?
ちょっと面倒ですが頑張って下さい。
(無題)
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No.2769-3 - 2009/01/31 (土) 09:57:46 - 免疫屋
コンタミの可能性を除外できる理由(根拠)があるのですか?
~さんの指摘されたピペットマンに加えて,水,酵素,バッファー,プライマーすべてを新しくしたうえでのご相談でしょうか?
(無題)
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No.2769-2 - 2009/01/31 (土) 07:45:31 - ~
ピペットがすでに汚染されていて、
フィルター付きチップで操作したら出なくなったことがあります。
サイズによっては、プライマーダイマーかもしれません。
PCRについて
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No.2769-1 - 2009/01/31 (土) 07:10:19 - 初心者
初心者です。どなたか教えていただけませんか。
PCRでネガティブコントロールの水にもポジティブバンドが出てしまうのですが、コンタミ以外に、何か理由は考えられるのでしょうか?30−35サイクルではポジコンよりは薄いのですが。
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