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p38 インヒビター トピック削除
No.2766-TOPIC - 2009/01/30 (金) 16:22:47 - 小児科医師(ゆとり教育)
いつもお世話になっております。

腎尿細管細胞に薬剤を添加してMAPキナーゼの一つであるp38 MAPのリン酸化動態を観察しています。今回は、p38 MAPキナーゼ阻害剤であるSB 202190(1uM-20uM、DMSOにて溶解。DMSOの最終濃度は最大で0.1%)で添加してウェスタンブロットにて検出しました。下のバンドがリン酸化p38 MAPです。

1回目 http://www.picamatic.com/view/1898927_02/
2回目 http://www.picamatic.com/view/1898928_01/

写真のようにSB202190を添加した群の方がリン酸化p38 MAPが増強しています。また、2回目の写真のようにSB202190によるリン酸化p38 MAPの増強は濃度依存的であるようです。1回目、2回目と別のサンプルを作成してウェスタンブロットを行っているのでこれらの結果は再現性があると考えています。

本来、p38 MAPキナーゼ阻害剤であるSB202190がなぜリン酸化p38 MAPを増強させるのか理由がわかりません。この結果につきどのように解釈すればよいのか、ご教授いただけると幸いです。
 
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(無題) 削除/引用
No.2766-3 - 2009/01/30 (金) 17:43:40 - 小児科医師(ゆとり教育)
あべちゃんさん、ありがとうございました。なるほど、リン酸化活性を阻害するけれどもリン酸化レベルは上昇するという現象があるのですね。勉強になりました。

(無題) 削除/引用
No.2766-2 - 2009/01/30 (金) 16:52:10 - あべちゃん
私はSB203580の方をよく使っていました。
203580もp38の阻害剤で、p38のATPポケットに入り込むことでリン酸化活性を阻害します。この阻害剤でもp38のリン酸化レベルが上昇します。

p38をはじめ、MAPKが活性化するとデュアルフォスファターゼ(DUSP)などネガティブフィードバックにかかわる脱リン酸化酵素の発現や活性に影響を与えます。

細胞内ではアニソマイシンなどp38を活性化する試薬やストレスを加えなくても基底レベルでp38は燐酸化されますが、その都度、フィードバック制御ですぐに脱リン酸化されます。

なので、p38の活性が失われると、p38を脱燐酸化する酵素群が活性化されず、p38のリン酸化フォームが蓄積すると考えられます。

p38 インヒビター 削除/引用
No.2766-1 - 2009/01/30 (金) 16:22:47 - 小児科医師(ゆとり教育)
いつもお世話になっております。

腎尿細管細胞に薬剤を添加してMAPキナーゼの一つであるp38 MAPのリン酸化動態を観察しています。今回は、p38 MAPキナーゼ阻害剤であるSB 202190(1uM-20uM、DMSOにて溶解。DMSOの最終濃度は最大で0.1%)で添加してウェスタンブロットにて検出しました。下のバンドがリン酸化p38 MAPです。

1回目 http://www.picamatic.com/view/1898927_02/
2回目 http://www.picamatic.com/view/1898928_01/

写真のようにSB202190を添加した群の方がリン酸化p38 MAPが増強しています。また、2回目の写真のようにSB202190によるリン酸化p38 MAPの増強は濃度依存的であるようです。1回目、2回目と別のサンプルを作成してウェスタンブロットを行っているのでこれらの結果は再現性があると考えています。

本来、p38 MAPキナーゼ阻害剤であるSB202190がなぜリン酸化p38 MAPを増強させるのか理由がわかりません。この結果につきどのように解釈すればよいのか、ご教授いただけると幸いです。

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