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(無題) 削除/引用 No.2756-5 - 2009/01/29 (木) 14:26:25 - にゅう 今度、凍結させずに回収したものと比較して流してみたいと思います。 ただ、これまでは毎回凍結させ、次の日にWBという流れで行っていたので、本当に凍結が原因かはわからないですが、一つずつ要因を潰していきたいと思います。 EcoRIさんありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.2756-4 - 2009/01/29 (木) 14:14:41 - EcoRI 保存の仕方次第ではサンプルの分解を招いてしまうこともあります。 精製(もしくは購入)直後のサンプルでWBするとどうでしょうか？ 問題が出たサンプルとfreshなサンプルをside-by-sideでWBすると、 原因が見えてくるかもしれません。 凍結が自分のタンパクにどのような影響を与えるかわからないときは、 とりあえず４度において、できるかぎり早く使ってしまいます。

(無題) 削除/引用 No.2756-3 - 2009/01/29 (木) 14:07:48 - にゅう EcoRIさんありがとうございます。 > どのように分かれているのでしょうか？ 小さく分かれています。分解でしょうか？保存の仕方がよくないのでしょうか？ サンプルは-20℃で保存しています。

(無題) 削除/引用 No.2756-2 - 2009/01/29 (木) 12:12:26 - EcoRI ぱっと思いつくのは分解だと思います。 二つに分かれる、分かれ方で何か示唆が得られると思うのですが、 大きく分かれてバンドがでるのか、分かれ方が小さいのかで、示唆するところの意味がかわって来ますね。 どのように分かれているのでしょうか？

ウエスタンでの二重バンド 削除/引用 No.2756-1 - 2009/01/29 (木) 11:55:05 - にゅう こんにちは。私は今ウエスタンブロッティングを行っています。目的の蛋白質はLC3で18kDaなのですが、LC3はI型とII型があり二つに分かれて検出されます。 最近なぜかLC3-Iだけが二つに分かれたように検出されます。以前はきれいに出ていたのですが、何が原因かわからずに困っています。どなたかご指摘お願いします。ちなみに分離ゲルはI型とII型を分けるために15％にしています。

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