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(無題) 削除/引用 No.2736-3 - 2009/01/27 (火) 09:08:06 - AP 追加 ・発色液に粒子状のゴミがある。NBT/BCIPの沈殿やMgなど。発色液にはMgCl2は入れない（Rocheのインストラクションでは、昔は入れていたけれど、今は禁忌となっていたはず）。発色液はフィルターしてから使う。

(無題) 削除/引用 No.2736-2 - 2009/01/27 (火) 09:04:58 - AP 可能性をいくつか ・プローブの鎖長が長すぎる、あるいは断片化が不十分で長すぎるフラクションが含まれている。長すぎるプローブは浸透しにくく、かつ洗浄されにくく、表面に強く吸着する。 ・プローブや抗体がアグっている。強く遠心して上澄みを使う。 ・ハイブリ液なのに粒子状のゴミがあって、これがプローブを吸着して標本の表面にひっつく。たとえばブロッキング剤（何を使っているのかしら）が完全に溶けていない。

WMISHの発色で非特異的な沈殿が胚に・・・ 削除/引用 No.2736-1 - 2009/01/27 (火) 02:33:18 - WMISH 現在Whole mount in situを行っているのですが、ここ3回連続で発色の段階で起こる問題に困っています。 発色はBM purple(NBT/BCIP)で行っていて、どのプローブを使っても同じように"胚の周囲"に青色の非特異的な沈着物が着いてしまい、きれいな結果が得られません。（シグナル自体はきれいな結果が得られています。） 新しいBM purple を使っても同じような結果となることから問題はBM purple以外だと考えられますが何が原因かさっぱり検討つきません。 一番考えられるのは、胚への抗体の非特異的な吸着だと思いますが、抗体反応後の洗浄も3日間行っていますし、20回以上はMABTを交換しているのでそう考えるのも難しいのです。 使用している胚はE10.5-12.5ですがステージに関係なく出てきますし、BM purpeを加温、遠心しても問題は解決しませんでした。 皆さんの中で同じような現象が起こった方、またアドバイス等ございましたらよろしくお願いいたします。

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