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ありがとうございます！ 削除/引用 No.2703-4 - 2009/01/23 (金) 22:30:55 - cho マチさんから教わったとおり、10μM以下で試したら 成功しました。ホント助かりました。 自己消光ですね。覚えておきます。 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.2703-2 - 2009/01/23 (金) 03:26:40 - マチ 4-MUの濃度が高すぎるのかもしれません。 mMレベルではなく、μMレベルにまで落として一度測定されてはいかがでしょうか。 有機蛍光化合物には全般的に言えることですが、 蛍光物質の濃度が高すぎた場合、 溶液中で非蛍光性の会合体になるなどして 蛍光が増すどころか逆に消光してしまう可能性があります。 これを「濃度消光」と言います。自己消光の一種ですが、自己消光と言えば概してこれを指すので、同一として扱われることも多い様です。 蛍光分析の分野では常識、と言えるほど一般的ですし、逆に濃度消光を利用したアッセイ法も数多く存在しています。 4-MUの自己消光が起こる濃度は存じませんが、蛍光物質によっては100mMでも消光しますので、ひょっとしたら、と思いコメントさせて頂きました。

4-MUの蛍光標準液について 削除/引用 No.2703-1 - 2009/01/22 (木) 18:13:37 - cho はじめまして。 プロモーター活性をGUS遺伝子を用いて蛍光基質MUGで測定しようとしています。 蛍光光度計を使うのはこれが初めてです。 まず、25mM 4-methylumbelliferone(4-MU) sodium saltを標準液として 励起365nm、蛍光455nmでスタンダードを取ったのですが、 その1/2の希釈の4-MU sodium saltではRFU値が倍に、 逆に2倍の50mMではRFU値が1/2くらいになってしまいました。 希釈間違えかと思い、もう一度してたのですが同じ結果でした。 ゼロ設定と希釈に用いたのは脱イオン水です。 蛍光光度計はVersaFluor（BioRad）を使っています。 なぜRFU値が希釈の逆になるのかわかりません。 考えられる原因をご教授いただけないでしょうか？

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