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(無題) 削除/引用 No.2662-9 - 2009/01/20 (火) 08:32:18 - おお >[Re:8] DSCさんは書きました : ありがとうございます。 なんか大人気のようです。クロンテックはGFPの次の大ヒット商品のようです あ、2ハイブリットも意外とよかったか、、、んTet/on/offもか、もうけてるなぁ。 > > > 実際には、cDNA 1st strandの途中のC-richな部位にSMART oligoの末端がアニールしたらしい、不完全長のクローンが取れてきたこともあります。 なるほどそれは現実起こっているわけですね。

(無題) 削除/引用 No.2662-8 - 2009/01/20 (火) 00:08:59 - DSC 私もここ10年ほど、SMARTを使っています。やはり（ほぼ）確実に全長cDNAがとれるのがいいですね。cDNA合成の後で鋳型RNAの量に応じたサイクル数のPCRが必要ですが、その前の段階では期待どおり(C)nの突出にSMART oligoが対合した全長cDNAの量がかなり乏しいのかなと思ったりします（RNA量が多ければ増幅は必要ないそうですが）。invitrogenにも似た原理のキットがありますが（イノシン塩基を含むややこしいデザインのプライマーが使われている）、やはりPCRが必須となっているようです。 昔はPCRを挟むだけで「クローンの配列が信頼性が低くなる」と邪道扱いでしたが、今どき（high fidelityのpolymeraseが増えたから？）そのことにこだわる人も減りましたね。今でもここにこだわる人には、これらのキットは敬遠されるかも。 > 3塩基しかないのでCCCとか並んでいる配列は末端のTdT処理した部分だけではないだろうにとも思ったりします。 実際には、cDNA 1st strandの途中のC-richな部位にSMART oligoの末端がアニールしたらしい、不完全長のクローンが取れてきたこともあります。

(無題) 削除/引用 No.2662-3 - 2009/01/19 (月) 14:04:39 - おお >[Re:2] Pumpkinさんは書きました : > 確かに短いと思いましたが、うまくいっているのでSMARTシリーズは多用しています。 ありがとうございました。3塩基しかないのでCCCとか並んでいる配列は 末端のTdT処理した部分だけではないだろうにとも思ったりします。 不思議なもんですね。

(無題) 削除/引用 No.2662-2 - 2009/01/16 (金) 21:24:20 - Pumpkin 確かに短いと思いましたが、うまくいっているのでSMARTシリーズは多用しています。ライブラリー外注会社やNormalize cDNAライブラリーの作製などにも使われているので定評はいいですよね。

SMART cDNAライブラリーようのキット 削除/引用 No.2662-1 - 2009/01/16 (金) 13:54:20 - おお クロンテックのSMART cDNAライブラリーようのキットのシリーズですが、 2ndストランド合成のために、TdTでCを1stストランドにつなげ、 そこにGGGを3'に含むプライマーをアニールさせ、伸長させるように なっています、G3個だけってすごく短いんですけど、 どう思いますか? SMARTのキットの定評は非常にいいようですが、、、

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