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アルコール固定した細胞でウエスタン トピック削除
No.2592-TOPIC - 2009/01/03 (土) 06:48:43 - M
お世話になります。
アルコール(メタノールかエタノール)固定してBrDUとDNA染色した細胞を、細胞周期ごとにソーティングした後に、ウエスタンブロッティングをしたいと考えています。脱水固定なので、ソーティング後に還元剤入りのSDSサンプルバッファーでしっかりと煮れば出来そうな気がしますが、そういう論文を見かけません。どなたか経験のあるかた、いらっしゃいませんでしょうか?よろしくお願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.2592-7 - 2009/01/04 (日) 01:44:19 - M
申し忘れましたが、
BrdU染色は塩酸処理が気持ち悪いので、その必要がないInvitrogenのClick-iT EdU kitを使おうかと思っています。
今後ともよろしくお願いいたします。

ありがとうございます。 解決済み 削除/引用
No.2592-6 - 2009/01/04 (日) 01:35:34 - M
おお様、blott様、
ご親切にどうも有難うございます。

(無題) 削除/引用
No.2592-5 - 2009/01/03 (土) 16:35:47 - blott
核の中のものならあまり流出も少なそうです。
ただ、アルコールを飛ばすときに、あまり乾かしすぎないように
するのがコツです。
液体は見えなくなって少しウェットな状態でSDSバッファーを加えれば
ほぼ完全に溶けると思います。
完全に乾固すると苦労します。

(無題) 削除/引用
No.2592-4 - 2009/01/03 (土) 09:16:33 - おお
あ、そうだ。アルコールの固定で見たいものが溶出したりしてないか
はチェックした方がよさそうです。

(無題) 削除/引用
No.2592-3 - 2009/01/03 (土) 07:33:46 - M
早速のコメント、どうも有り難うございます。
実験の計画を立ててみようと思います。
これからもどうぞよろしくお願いいたします。

(無題) 削除/引用
No.2592-2 - 2009/01/03 (土) 06:58:06 - おお
論文をしらべたり、見たりしたわけではないですが、できるでしょうね。
TCAで処理後95%アルコールで洗って、ウエスタンする方もいますし、
そういう意味ではあまり問題なさそうです。

アルコール固定した細胞でウエスタン 削除/引用
No.2592-1 - 2009/01/03 (土) 06:48:43 - M
お世話になります。
アルコール(メタノールかエタノール)固定してBrDUとDNA染色した細胞を、細胞周期ごとにソーティングした後に、ウエスタンブロッティングをしたいと考えています。脱水固定なので、ソーティング後に還元剤入りのSDSサンプルバッファーでしっかりと煮れば出来そうな気がしますが、そういう論文を見かけません。どなたか経験のあるかた、いらっしゃいませんでしょうか?よろしくお願いいたします。

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