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(無題) 削除/引用 No.2518-5 - 2008/12/18 (木) 22:19:37 - ペニ○ wortは不可逆的阻害なので、５時間も処理したら細胞は刺激に対してまともに反応しなかったり… てかH2O2処理でAktリン酸化されるんですね。細胞死にそうですけど…H2O2濃度が高すぎるとか… 参考までに 　Wort：IC50=1-10 nM LY　：IC50=10-50 uM だいたい僕は30 min- 1 hくらい処理します。 ○＝スです。

(無題) 削除/引用 No.2518-4 - 2008/12/18 (木) 22:04:22 - おお 過酸化水素。。。。何と比べているのでしょうか、、、 例えば血清刺激では動きますか(刺激してない場合と比べてとかで) PTEN活性が強い可能性はありますか?

(無題) 削除/引用 No.2518-3 - 2008/12/18 (木) 20:07:11 - M ありがとうございます。 過酸化水素で刺激します。これで、p-Aktは確認しています。 一般的に、前処理の濃度、時間はどれくらいなのでしょうか？ LY294002も検討中です。よろしければ条件をお教えください。

(無題) 削除/引用 No.2518-2 - 2008/12/18 (木) 00:17:08 - ペニ○ 前処置後、なにかAktがリン酸化されるような刺激を加えているのですか？ ちゃんと刺激でbandが出現していることは確認済ですか？ そのband（確かにリン酸かを見ている）がWort処理で消えないのですか？ 5 hも処理しないといけないんですか？ Ly294002でも試されましたか？ ５時間ってのが気になります。。

Wortmannin前処理 削除/引用 No.2518-1 - 2008/12/17 (水) 23:35:14 - M Wortmanninで肝癌細胞株を前処理し、p-Aktが抑制されているかをWesternblot で示したいのですが、どんな条件（前処理の時間、濃度）がよいのでしょうか？ 前日にnon-serumの培地に交換し、1〜10μMの濃度で5時間でやってみたのですが、うまくいきません。 論文をみても様々ですし、どなたかお教えください。

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