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ええとさん 削除/引用 No.250-8 - 2007/10/10 (水) 12:14:51 - taka そういうことですか。 メールではヤリトリしてませんので御心配なく。 これからも活発な情報交換ができればと思います。

(無題) 削除/引用 No.250-7 - 2007/10/10 (水) 04:53:54 - ええと takaさん mikaさんがメールアドレスに直接返信され、Takaさんが それに返信する形になるとやりとりがCloseになってしまう という意味で書きました。紛らわしくてすみません。 書き込みなさった250-4は読めます。

ええと　さん 削除/引用 No.250-6 - 2007/10/06 (土) 14:18:53 - taka 非公開って何のことですか？ いまいちこの掲示板の使用方法が分からないので意味がわかりません。 質問に対する解決策を記入したつもりですが、見れませんか？

takaさん、mikaさん 削除/引用 No.250-5 - 2007/09/29 (土) 07:26:38 - ええと せっかくの掲示板なので、情報のやりとりは「公開」にしませんか？ 恐らく、参考にしたい方は他にもいらっしゃるかと思いますし。 余計な書き込みとは思ったのですが、非公開が進むとせっかくの場が もったいないことになるかと思ったもので。

状況がイマイチ把握できませんが 削除/引用 No.250-4 - 2007/09/28 (金) 23:49:38 - taka 例えばanti-Rbでいくべきところを、anti-Msでいっちゃったとかなら、HRP標識の場合、酵素活性はアジ化ナトリウムで失活できるので、わざわざストリッピングする必要ないです。僕はblocking bufferやwashing bufferに0.05-0.1%のアジ化ナトリウムを添加してメンブレンを1時間以上rotationすることで間違った2次抗体のＨＲＰ活性を無力化させます。その後、正しい2次抗体で反応させます。 そもそも、間違った2次抗体反応で有意なバンドが出ていなかったなら、失活させる必要すらなく、再度正しい2次抗体で反応させます。 的外れな返答でしたら、もう少し状況を教えてください。通りすがりで見ているだけなのでメアド載せておきます。

(無題) 削除/引用 No.250-3 - 2007/09/27 (木) 16:09:17 - taru ■メンブレン上の抗体除去 0.5M Tris-HCl pH6.8 2.5mL 10% SDS 2mL 2-mercaptoethanol 0.6mL MilliQ water 14.9mL 1．これを50mLのコーニングチューブにいれて、あまり泡立てないようによく混ぜてから、50℃の恒温器で30分温める 2．ハイブリパックにメンブレンと上記の溶液を十分量いれてパックし、50℃で30分温める 3．Washing bufferで5分5回Washする 4．以下、Blocking>1st antibody>2nd antibodyと定法にてWesternを行う 2回ぐらいまでならこの方法で抗体を除去してReblotすることが可能ですよ♪

(無題) 削除/引用 No.250-2 - 2007/09/27 (木) 15:25:59 - Fresh なにをどう間違ったのでしょう？ 二次抗体のターゲットは正しいけど、違うラベルだった？ ターゲットが違う二次抗体をつかってしまった？ そのほか？

westernで 削除/引用 No.250-1 - 2007/09/27 (木) 14:17:26 - mika 二次抗体を間違ったものを使用してしまったのですが、 リカバリーを利かせる方法などありますでしょうか？ Sampleはもう無く、また作り直すことができません。 良い方法がありましたらよろしくお願いします。

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