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かぶってた．．．．．． 削除/引用 No.2467-5 - 2008/12/09 (火) 18:02:25 - ザンギ

(無題) 削除/引用 No.2467-4 - 2008/12/09 (火) 17:54:20 - ザンギ プライマーを換えるほうがベターなシーケンス波形が得られるのは間違いないです。 でも、増幅配列の確認をするのが目的ならば、プライマーがマッチするかどうかをPCRでチェックしてからのほうが無駄が少ないと思いますよ。 PCRのかからないプライマーではシーケンスもできません。

(無題) 削除/引用 No.2467-3 - 2008/12/09 (火) 17:50:56 - おお PCRフラグメント内に、プライマ-と同じ配列があれば、増幅した時の プライマーと違っても配列は読めます。 プライマーのパフォーマンスがプライマーごとで 違い、特定のプライマーだけがかかりにくいという 可能性はあります(でも経験的にたいてい大丈夫 ですけどね)、とくにPCRプライマーとして働くなら ほぼ大丈夫でしょう)。

(無題) 削除/引用 No.2467-2 - 2008/12/09 (火) 14:59:06 - df できます。 というかダイレクトシークエンス法ではそれが基本です。 Nested PCR法のように1stのプライマーの内側に2ndプライマーを設計して 増幅の特異性を向上させるのは一般的な手法です。

PCRと異なるプライマーでシークエンスできるのか？ 削除/引用 No.2467-1 - 2008/12/09 (火) 13:47:12 - 佐山あやこ 例えば27Fと1492Rを使いPCRにより16srDNAを増幅させ、518R, 337F, 785F でシークエンスを行うということはできるのでしょうか？ 個人的には、できはするけれど、 ちょっと問題がありそうな気がするのですが・・・

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