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DTTです。 削除/引用 No.2464-2 - 2008/12/09 (火) 07:32:18 - tx Ni-NTAのニッケルイオンがDTTで還元されるとHisタグとくっつけないです。10 mM DTTは高すぎます。DTTを除きましょう。

変性条件下でのHisタグタンパクのバッチ精製について 削除/引用 No.2464-1 - 2008/12/09 (火) 03:39:05 - meisa Hisタグタンパクを7.5Mグアニジン(PH9)と10mMDTTで可溶化後、キアゲンのNi-NTAを用いてバッチ精製を行っています。 　ところが、ライセート＋NiNTA mixをカラムにロードした時のフロースルー に目的のHisタグタンパクが溶出してしまいます。 　ウエスタンでこのフロースルーを確認すると、抗His抗体でも目的のタンパクに対する抗体でもバンドが検出されていました。 　このような場合、どうすれば目的のタンパクがカラムにひっかかってくれるのでしょうか？これはタンパクがNi-NTAレジンにひっかかっていないということなのでしょうか？

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