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(無題) 削除/引用 No.2457-6 - 2008/12/13 (土) 19:34:47 - mm >おおさん 酵素なしでPCRしてコントロールにするのですね！ なるほどです！やてみます！！

(無題) 削除/引用 No.2457-5 - 2008/12/11 (木) 00:44:37 - おお よくやられるDNA(プラスミドやPCRフラグメント)のアガロース電気えいどう での検出限界はエチブロで5-10ngくらいです。参考までに。 PCR酵素マイナスで、コントロールとると増えぐあいが分かるかもしれません。 DpnI処理でも良いですが。

(無題) 削除/引用 No.2457-4 - 2008/12/09 (火) 17:13:15 - mm > Kさん やはりプライマーの問題でしょうか 説明書に載っている量からスタートしてうまくいかず、あれこれ量を増やしていったところバンドは薄いままでプライマーダイマーはたっぷりできてしまいました･･･ ありがとうございます！すこしプライマーを長くしてみます！ > ぱんたさん 確かに多いですよね･･･ 50μの系で100までと書いてありました。 さっそくDnp�T処理後のものを流してみます！

(無題) 削除/引用 No.2457-3 - 2008/12/08 (月) 20:06:18 - ぱんた 鋳型がちょっと多いような気がしますが？ DpnI処理後のサンプルを流してみれば、鋳型かPCR産物かが分かると思います

おそらく 削除/引用 No.2457-2 - 2008/12/08 (月) 18:42:26 - K バンドが薄くて、トランスフォーメーションには量が足りなかった可能性が高いと思います。 プライマーダイマーなどが出来ていないか、チェックした上で、 ・配列を２塩基ほど長くする。 ・プライマーのＣ末端をＧ/Ｃにしてみる。 など プライマーを設計しなおすのがいいと思います

QuickChangeを使っていますがコロニーができません 削除/引用 No.2457-1 - 2008/12/08 (月) 16:59:38 - mm QuickChange�USite-Directed mutagenesis kitを使って変異の導入をしています。 コントロールではコロニーができるのに、実際のsampleでは全くコロニーができません。 PCR後の電気泳動ではバンドが出ている（コントロールのものよりはずいぶん薄いですが･･･）のでPCRはうまくいっていると判断していいのでしょうか？それともこれはもともと入れたtemplateを見ているだけなのでしょうか？ ちなみに反応は20μの系でtemplateは100ng入れています。 電気泳動は反応液から5μとって流しています。 よろしくおねがいします。

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