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増殖期における遺伝子発現量 トピック削除
No.2456-TOPIC - 2008/12/08 (月) 15:44:26 - さや
現在、親株と遺伝子組み換え株において、
遺伝子の発現量を比較する実験(リアルタイムRT-PCR)を行っています。
具体的には、前培養を2回行なった後、ジャーファメンターで培養を行い、
増殖曲線を作成しながらサンプリングを行なっています。

ここでアドバイスを頂きたいのが、サンプリングのタイミングです。

現在は、対数増殖期から減衰期に入る手前を目安として
サンプリングを行なっています。
その理由は一番菌体量が多くて菌が活発な時だと考えたからです。

あまりに初歩的は質問で申しわけないのですが、
対数増殖期真っ只中の菌と、減衰期手前の菌では
どちらの方が遺伝子の発現が多いでしょうか?
また遺伝子発現量を比較する際には、どのタイミングでサンプリングを
行なうことがベストでしょうか?
 
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(無題) 削除/引用
No.2456-3 - 2008/12/08 (月) 16:49:39 - おお
>[Re:1] さやさんは書きました :

> 対数増殖期真っ只中の菌と、減衰期手前の菌では
> どちらの方が遺伝子の発現が多いでしょうか?

これって質問になってるような、なってないような、、、
amiさんがツンとコメントしてください!

> また遺伝子発現量を比較する際には、どのタイミングでサンプリングを
> 行なうことがベストでしょうか?

まず、あなたの破壊した遺伝子の性質から
何が期待できますか?それがどの細胞の増殖の
フェイズで重要ですか?

もしそれが分からないなら、あなたの破壊した
遺伝子は従来どの細胞の増殖のフェイズで発現
して(機能を発揮して)いるのかを実際に
各フェーズの発現量を調べてから、よく発現
しているフェーズで、比較した方がいいかもしれません
全く発現していないフェーズで比較しても意味がありませんから。

たいていの場合は対数増殖期(の後期)で細胞を
とると思いますが、それがいつも正解とはいえません。

(無題) 削除/引用
No.2456-2 - 2008/12/08 (月) 15:59:36 - よっしー
ものによって違います.
対数増殖前期しか発現しない物,中期以降にするもの,後期から発現するもの
様々です.
ですから対数増殖前期,中期,後期,定常期で比較するのが良いと思います.
ターゲットが決まっているのでしたら,そのターゲットが発現している時期だけでもいいのかもしれませんが・・・.

増殖期における遺伝子発現量 削除/引用
No.2456-1 - 2008/12/08 (月) 15:44:26 - さや
現在、親株と遺伝子組み換え株において、
遺伝子の発現量を比較する実験(リアルタイムRT-PCR)を行っています。
具体的には、前培養を2回行なった後、ジャーファメンターで培養を行い、
増殖曲線を作成しながらサンプリングを行なっています。

ここでアドバイスを頂きたいのが、サンプリングのタイミングです。

現在は、対数増殖期から減衰期に入る手前を目安として
サンプリングを行なっています。
その理由は一番菌体量が多くて菌が活発な時だと考えたからです。

あまりに初歩的は質問で申しわけないのですが、
対数増殖期真っ只中の菌と、減衰期手前の菌では
どちらの方が遺伝子の発現が多いでしょうか?
また遺伝子発現量を比較する際には、どのタイミングでサンプリングを
行なうことがベストでしょうか?

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