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免疫染色2重染色時のプロトコール トピック削除
No.2432-TOPIC - 2008/12/04 (木) 10:13:53 - めんせん
いつも参考にさせていただいております。
ある2つの抗体を蛍光抗体を用いて2重染色しようと思っております。

一次抗体→二次抗体(ALEXA標識)で行おうと思っています。
教科書にはだいたい2重染色の場合、1つ目の抗体が終わってから2つ目の抗体を処理するというプロトコールになっていますが、
2つの一次抗体(由来はそれぞれウサギとマウスで別)を混ぜて4℃、
O.N、その後2つの2次抗体を混ぜてRT.2時間反応、というプロトコールでも可能でしょうか。また別々にした場合に比べバックが高くなるなどの問題が生じたりするものなのでしょうか?
お願い致します。
 
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(無題) 削除/引用
No.2432-2 - 2008/12/04 (木) 11:13:24 - RSC
これまでの染色経験からそのように行って問題なくできました。
別々に行ったことがないので、バックグラウンドが高くなるかどうかはわかりませんが。
参考までに。

免疫染色2重染色時のプロトコール 削除/引用
No.2432-1 - 2008/12/04 (木) 10:13:53 - めんせん
いつも参考にさせていただいております。
ある2つの抗体を蛍光抗体を用いて2重染色しようと思っております。

一次抗体→二次抗体(ALEXA標識)で行おうと思っています。
教科書にはだいたい2重染色の場合、1つ目の抗体が終わってから2つ目の抗体を処理するというプロトコールになっていますが、
2つの一次抗体(由来はそれぞれウサギとマウスで別)を混ぜて4℃、
O.N、その後2つの2次抗体を混ぜてRT.2時間反応、というプロトコールでも可能でしょうか。また別々にした場合に比べバックが高くなるなどの問題が生じたりするものなのでしょうか?
お願い致します。

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