全5件 ( 1 〜 5 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

ありがとうございました。 削除/引用 No.2400-5 - 2008/11/27 (木) 19:55:13 - かぜ 大変迅速に解説いただきありがとうございました。 参考にさせていただきます。

(無題) 削除/引用 No.2400-4 - 2008/11/26 (水) 23:52:42 - NF 1. 複数必要です。１種類だけだと、オフターゲットの可能性を排除できません。１種類だけの場合は、最低リカバリー（siRNA耐性の遺伝子c）は必要です。 以前のトピックに同じような質問があったと思うので、確認して自分の系と比較してください。

(無題) 削除/引用 No.2400-3 - 2008/11/26 (水) 22:43:45 - がせ >[Re:1] かぜさんは書きました : > １．複数の種類のsiRNAを使用して、結果が保存されることを示すべきか？ 以前、複数のsiRNAを用いることと同時に、siRNA耐性の遺伝子cを追加で導入してAがBになるのを示すよう求められたことがあります。しかし、思うようにいかず、考察を追加しただけでしたが。

(無題) 削除/引用 No.2400-2 - 2008/11/26 (水) 21:20:24 - りょう >[Re:1] かぜさんは書きました : > > １．複数の種類のsiRNAを使用して、結果が保存されることを示すべきか？ あなたが観察されている現象（A to B)に対して、C-specific siRNA#1のOff-target効果によって現象（A to B)が起こらなくなる可能性を否定するには複数のC-specific siRNA(#1,#2)での検討が必須でしょう。 > ２．ネガコンとしては、やはり市販のcontrol.siRNAのみでよいか、 > 　　（論文によってはGAPDHsiRNAを用いてるものもあるが） control-siRNA(universalなものでしょうか？種類があるならGC contentをC-specificなものと大まかに合わせておいた方が良いでしょう)は1種でも良い気がします。 > ３．ノックダウンの証明は通常はウエスタンだが、 > 　　抗体がなければRT-PCRでもよいか？ RT-PCRで良いです。市販のvalidated-siRNAもRT-PCRでの検討で70%くらいknockdownされるかどうかのレベルではないでしょうか。 僕の意見はこんなところです。

siRNA実験に関して 削除/引用 No.2400-1 - 2008/11/26 (水) 19:49:54 - かぜ siRNA実験によるノックダウンの実験に関して質問です。 siRNAで、十分にノックダウン出来ることがわかってる pre-designedのものがありますよね？ それで実験を行うことを前提として、 １．複数の種類のsiRNAを使用して、結果が保存されることを示すべきか？ ２．ネガコンとしては、やはり市販のcontrol.siRNAのみでよいか、 　　（論文によってはGAPDHsiRNAを用いてるものもあるが） ３．ノックダウンの証明は通常はウエスタンだが、 　　抗体がなければRT-PCRでもよいか？ この３点につき質問です。 特に１は論文のmethod読んでも、明記してないものが多いので、 １種類のみでよいのか、最低２−３種やるべきかです。 なお、示したい事項は、 Aという細胞が、ある培養系でBになる、という現象を引き起こすのに、 恐らくCという蛋白が関与していることを示すために、 Cに対するsiRNAの系で示しにいくものです。 すなわち、siRNAを入れてやると、AはBにならない、 ネガコンではBになる、ということを示したいのです。 ちなみに、anti-Cというコマーシャル抗体はありません。 よろしくお願いします。

全5件 ( 1 〜 5 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

---