いつもお世話になっております。
現在、培養細胞を用いてウェスタンブロットを行っています。培養終了後、PBSで1回洗浄、Cytosolic extraction bufferにて細胞を融解し、14000rpmで5分遠心します。上清を細胞質分画として保存し、沈殿にNuclear extraction buggerにて核を融解し、14000rpmで5分遠心して、上清を核分画としてリン酸化たんぱくの検出をしています。
細胞全体を融解してウェスタンブロットを行う場合には、コントロールタンパクとしてActinやGAPDHなどが使用されることが多いと思いますが、核分画をウェスタンブロットした場合のコントロールタンパクとしてはどのようなものが使用されることが多いのでしょうか?ご教授いただけると幸いです。 |
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