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出芽酵母の減数分裂細胞のウエスタン トピック削除
No.2390-TOPIC - 2008/11/25 (火) 01:10:22 - 教えてください
出芽酵母の減数分裂に入っている細胞から蛋白質を抽出してウエスタン解析をしようとしています。減数分裂に入れていない通常に生育中の細胞を使うときには、SDS-lysis バッファーを入れてBoilとFreeze&thawを数回繰り返すだけで簡単に抽出でき、ウエスタンも綺麗に結果が観れます。しかし不思議なことに減数分裂に入った細胞では、同様に処理しても全くシグナルが見えません。どなたか、簡単に減数分裂に入った細胞からウエスタンの為に使える簡便な蛋白質抽出方法をご存じありませんか?
 
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(無題) 削除/引用
No.2390-4 - 2008/11/27 (木) 13:24:46 - おお
ビートビーターとかいう破砕機がいいと聞いたことがあります。
うわさだけで、実際はよく分からないのですが。

(無題) 削除/引用
No.2390-3 - 2008/11/25 (火) 04:57:18 - やま
ウエスタンはしたことがないのですが、減数分裂時の細胞でLacZを測定するのにはY-PERで問題ありませんでした。試してみてはいかがでしょうか?

(私はいつもウエスタンにはアルカリ-SDS法でタンパクを抽出していますが残念ながら減数分裂時の細胞ではやったことがありません)

>ami様
減数分裂時の細胞ではRNAも極端に取りづらくなるため可能性はあると思います。

それって 削除/引用
No.2390-2 - 2008/11/25 (火) 02:09:25 - ami
抽出法の問題だといえる根拠があるんですか?

出芽酵母の減数分裂細胞のウエスタン 削除/引用
No.2390-1 - 2008/11/25 (火) 01:10:22 - 教えてください
出芽酵母の減数分裂に入っている細胞から蛋白質を抽出してウエスタン解析をしようとしています。減数分裂に入れていない通常に生育中の細胞を使うときには、SDS-lysis バッファーを入れてBoilとFreeze&thawを数回繰り返すだけで簡単に抽出でき、ウエスタンも綺麗に結果が観れます。しかし不思議なことに減数分裂に入った細胞では、同様に処理しても全くシグナルが見えません。どなたか、簡単に減数分裂に入った細胞からウエスタンの為に使える簡便な蛋白質抽出方法をご存じありませんか?

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