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(無題) 削除/引用 No.2386-4 - 2008/11/25 (火) 10:09:46 - mahimahi 皆様Responseありがとうございます。 FBSはGibcoですがTet -のものを使っています。 leakyな発現がありうると聞いて少し安心しました。 Doxy -でよく光っているクローンがそこそこできてきたので心配しておりました。 Doxy で発現がtightにコントロールされているクローンを拾えば良いわけですね ありがとうございました。

Tet-free FBS? 削除/引用 No.2386-3 - 2008/11/24 (月) 10:51:09 - m Tet-freeのＦＢＳを使ってみたらどうでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.2386-2 - 2008/11/24 (月) 03:57:07 - おお TETのシステムはほかの誘導システムよりリークが少ないですが、 やはりリークはある程度あるようです。 でGFPは非常に安定で半減期が長い(半減期がみじかい変異体も 作られてますが)ので、微量のmRNA発現でも、GFPが蓄積してきて 検出が可能ということも考えられます。 そのほか、クローンによりバリエーションがでるのは GFPでなくても起こり得ますので自分の実験にあった クローンを拾うのが普通かと思えます。 たとえば、テットのレギュレーションの部分がきれて、 内在性のプロモーターと融合して、ターゲットが発現している というクローンもあっておかしくはないですし(頻度は高くないでしょうけど)。

Tet On advanceでDoxyなしで発現？ 削除/引用 No.2386-1 - 2008/11/23 (日) 22:46:47 - mahimahi いつも参考にさせてもらっております。 現在Tet On advance systemを用いて 発現させたい遺伝子(GFP etc)をpTER-Tightにクローニングして 細胞株を取ろうとしています. 今の所DoxyなしでもGFP positiveのクローンが出現してきております。 理論的にはDoxyがないとGFPは発現しないはずと思いますが なぜこのような事が起きえるのかご存知の方がおられれば 教えていただけると助かります。

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