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(無題) 削除/引用 No.2359-4 - 2008/11/20 (木) 09:40:11 - K山 組織さん＆千さん 返信ありがとうございます。 とりあえず抗体を100倍、500倍、1000倍、10000倍、20000倍とでもして一回染めてみようかと思います。 またうまくいかなかったときはよろしくお願いします。

(無題) 削除/引用 No.2359-3 - 2008/11/19 (水) 17:10:50 - 組織 新鮮凍結切片で蛍光免疫染色でしょうか。 プロトコールは特に問題なさそうですね。強いて言えば固定は4％PFAだけでも十分ではないでしょうか。 私も一次抗体濃度を上げれば染まる気がします。条件検討で抗体濃度を振るときは、思い切って10倍くらい変えた方が良いです。2倍3倍では結果はあまり変わらないと思います。今回の場合なら、100倍、1,000倍、10,000倍くらいで試されてはいかがでしょうか。

データシートは？ 削除/引用 No.2359-2 - 2008/11/19 (水) 16:35:40 - 千 単純に、一次抗体が薄くないですか？ データシートの推奨希釈濃度は何倍でしょう？ まずは500倍、100倍くらいの濃度で検討されてはいかがでしょうか。

c-fosの免疫染色について 削除/引用 No.2359-1 - 2008/11/19 (水) 15:16:52 - K山 ニューロンにc-fos染色を行ってみたのですが、うまく染まりませんでした。 以下のように行いました。 2% パラフォルム 15min ↓ 4% パラフォルム 15min ↓PBS洗浄 0.3% Triton X 15min ↓洗浄 2%ブロックエースPBS　30min ↓ c-fos(CalbiochemのAb-5で5000倍、12000倍、20000倍希釈）4℃で一日 ↓洗浄 二次抗体 rabbit　2hr以上 ↓洗浄 封入 ブロッキングで他のものを使うべきなのか他に何か悪いところがあるのかよくわかりません。 何か原因となるところなど見つけた方は教えてください。

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