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(無題) 削除/引用 No.2352-5 - 2008/11/23 (日) 19:54:51 - L リニア　と　ニック入り　という可能性があるんじゃないかと。 どのあたりに出たバンドかにもよりますが。

(無題) 削除/引用 No.2352-4 - 2008/11/18 (火) 22:23:01 - おお >[Re:3] さぶろうさんは書きました : > これは、１つのコロニー中に複数のプラスミドが入るということでしょうか？ トランスフォーメーション直後、一つの大腸菌に複数の種類のプラスミドが 存在する可能性です。

(無題) 削除/引用 No.2352-3 - 2008/11/18 (火) 20:57:32 - さぶろう >シングルクローンからPCRレベルでヘテロに見える理由に トランスフォーメションのとき、大腸菌に複数のプラスミド がはいるという事実が挙げられます。 これは、１つのコロニー中に複数のプラスミドが入るということでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.2352-2 - 2008/11/18 (火) 06:06:58 - おお もし、複数のポジティブクローンで、同様にエクストラの バンドが得られるなら、単なるPCRのノンスペの可能性が高いと思います。 それぞれのクローンが同じ割合で、ヘテロになっていると いうのは考えにくいので。 そのエクストラバンドのサイズに何か心当りはありますか? シングルクローンからPCRレベルでヘテロに見える理由に トランスフォーメションのとき、大腸菌に複数のプラスミド がはいるという事実が挙げられます。その後増殖していくうちに 一種類に収束するので、ミニプレップでは1種類として扱う わけですが。

１コロニーには１種類のplasmid？ 削除/引用 No.2352-1 - 2008/11/18 (火) 02:30:26 - さぶろう サブクローニング初心者です。 教科書的な質問で申し訳ないのですが、transformation後LBプレートにまいた際のコロニーは、1つのコロニーに１種類のみのplasmidが入っているものなのでしょうか？ 　先日１コロニーからプラスミドを精製しPCRをかけたところ、目的のバンド以外に薄いnon-specific bandが数本認められたのですが、これはPCRおよびプライマーの問題と考えてよいのでしょうか？ 　ちなみにこの精製したプラスミドのシークエンスはきれいに読めており、配列は目的の配列と一致していました。

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