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(無題) 削除/引用 No.2347-7 - 2008/11/17 (月) 19:22:51 - - Aさん フォローありがとうございます。 そんな感じがしたんですが、しっかりマニュアルを読むという姿勢を つけてもらいたくて、あのように書きました。 ！さん pcDNAの様な発現ベクターで遺伝子を発現させる場合、 Featureのところに書いてあるとおり polyA additional signal（AATAAAのような配列でその配列の１５塩基？後から polyAを付加する）が入っています。 なのでpolyAを付けてクローニングする必要はありません。 また、termination codonの後の非翻訳領域には、mRNAの安定化調節配列 がある遺伝子が時々あります。その配列のせいでmRNAが選択的に分解される というような事があるので、出来れば余計な配列は入れない方が良いと思います。 ですので、ATGから（Kozak配列は必要ですが）temination codonまでを クローニングした方が良いと思います。

(無題) 削除/引用 No.2347-6 - 2008/11/17 (月) 18:45:17 - A - -さん >マニュアルを全く読んでいませんね？ 多分！ さんはこの辺り初心者でマニュアル見ても多分見つかられないのでは？ ！ さん。 私がリンクから辿って関連資料を見てみた感じでは Page3に "The gene of interest is cloned into the multi cloning site of the inducible expression vector," と書いてありますから！ さんが発現させたい遺伝子の開始コドンから停止コドンまでの遺伝子が発現ベクターのMCSに入っていればpolyAがついていてもいなくても発現できそうな感じです。少なくともpolyAが必須であれば普通断りがあるはずです。とりあえず何も考えずにpolyAを入れておけば安心だとは思います。ただし、私もクローニング（特に大腸菌以外）は詳しくないのでそのまま受け売りしほしくありませんので、周りの先輩やスタッフでこの辺りに詳しい人に相談するかメーカーのテクニカルサービスにご自分で確認を取ってください。

見つかりました。 削除/引用 No.2347-5 - 2008/11/17 (月) 18:33:25 - ！ ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.2347-4 - 2008/11/17 (月) 18:20:19 - - マニュアルのベクターの説明のところで、 どのような塩基配列が含まれているかが書いてあります。 (Features of pcDNA4/TOのところ） そこでpolyAと関係ありそうな配列の情報を見ればわかると思います。

ご返答ありがとうございます。 削除/引用 No.2347-3 - 2008/11/17 (月) 16:38:00 - ！ マニュアル・プロトコールともに読んだのですが、その点については触れられていない様なのです。 もう一度しらみつぶしに読んでみます。

(無題) 削除/引用 No.2347-2 - 2008/11/17 (月) 15:42:39 - - マニュアルを全く読んでいませんね？ ダウンロード可のマニュアルに書いてあると思います。

タンパク発現用ベクターのインサート 削除/引用 No.2347-1 - 2008/11/17 (月) 15:26:41 - ！ タンパク発現用ベクターを作りたいのですが、ポリAはインサートとしてベクターに入れた方がいいのでしょうか？ 一般論を教えて下さい。 入れようとしているベクターは以下URLのｐｃDNA4/TOです。 基礎的質問すみません。 　 http://www.invitrogen.co.jp/catalogue/invitrogen/K1020-01_001.shtml

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