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キット試してみます 削除/引用 No.2341-5 - 2008/11/19 (水) 10:28:01 - らしでむ 名無しさんの処方で抗体を剥離してみようかと思いましたが、ちょうど隣のラボに海外ポスドクさんに教えてもらったRestore Western Blot Stripping Bufferがあったので、そのキットを試させてもらうことになりました。 情報をありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.2341-4 - 2008/11/17 (月) 18:14:29 - 名無し すごい昔どっかで聞いてその組成でやってます。6M Guanidine-HCl, 5%bME, 50mM Tris-HCl (pH7.5くらい）です。室温で３０分くらい振ってます。TrisじゃなくてHEPES bufferとかでもいいです。0.15MくらいのNaClを入れ人もいるらしいですが、両方やりましたが結局どっちでもいいみたいです。GdnHCLはいってるのでSDSだとかカリウム塩は入れないでください。熱かけたことはありません。割と適当にやってますが室温で余裕ではずれます。PVDFだとこの溶液にいれると透明っぽくなりますが、水に戻すとちゃんと元に戻るのでびっくりしないでください。この処理のあとはよく水で洗いましょう。多めの水で１０分ｘ４ないし５回　or もっと、くらい洗ってます。（時間なくていい加減に洗ったら２回目バックがすごい汚くなったことがあるので）

(無題) 削除/引用 No.2341-3 - 2008/11/17 (月) 10:54:59 - おお この話題は幾度とされてきたと思います。 ある人は酸性(GLYCINE HCl pH 3以下)またある人はアルカリ性(NaOH、濃度は忘れました) にふったり、グアニジンHClだとか(だぶん6Mぐらい)、人それぞれの方法があるようです。 キットはたしかに加熱しなくてすむので、便利ですが中身が分からなかったり、、、

(無題) 削除/引用 No.2341-2 - 2008/11/17 (月) 08:34:28 - 海外ポスドク Thermo SCIENTIFIC (旧PIERCE？） Restore Western Blot Stripping Bufferは室温でも高効率でストリップしてくれますし，37℃でさらに効率をあげることもできるので気に入っています． 他との比較はあまりしていませんが．

WBでの抗体剥離 削除/引用 No.2341-1 - 2008/11/17 (月) 03:15:55 - らしでむ ウェスタンブロットの際に室温でできる抗体剥離法を探しています。 どなたか良い方法やキットについての情報があれば、おしえていただきたいです。 よろしくお願いします。

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