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(無題) 削除/引用 No.2332-10 - 2008/11/19 (水) 19:17:52 - 通りすがり このトピックと同じような情報を見つけたので、一応貼っておきますね。 http://www.proteome.jp/Q&A/Q&A55.html 親ページの http://www.proteome.jp/Q&A/ によれば、 >羊土社発行の『タンパク質研究なるほどＱ＆Ａ』 にも掲載されているそうです。

(無題) 削除/引用 No.2332-9 - 2008/11/19 (水) 17:42:26 - A ゲル中のタンパク質は既に染色液で固定されてしまっていますから基本的にそのままブロットするのは無理でしょう。以前どのトピだったかわかりませんが銀染色したタンパク質のバンドをゲルから切り出して抽出、再度ゲルに流してWBというのはありましたからCBBで染色されたサンプルであってもこの方法ならできるかもしれません。もちろん手間ですがなけなしのサンプルでならその手間を惜しむわけにはいきませんから。

(無題) 削除/引用 No.2332-8 - 2008/11/18 (火) 13:48:27 - 名無し 出来ないことはないと思います。でも、ふつうのゲルをトランスファーするのと比べて同じようにいくかどうかはかなり疑問です。移らない蛋白質もあるでしょう。転写効率は下がるように思います。だからよほど特別な事情がないかぎり普通はしません。染色してから転写せざるをえない理由は何でしょうか。

(無題) 削除/引用 No.2332-7 - 2008/11/18 (火) 11:22:54 - おお ま、ダメ元でやるんだったらやってみればという ところじゃないでしょうか、SDS入りのバッファーで 置換してやって、ウエットなら長めにながすと 何とかなるかもしれません。メタノールぬきか5%ぐらいで トランスファーバッファーにSDS加えた系でPVDFをつかって やるでしょうね、私がどうしても必要と思えば。 その前に条件検討をして置けばなおさらいいのですが 、、、、 CBBでぶっとく見えているバンドであれば10%でも移れば 検出できるかと思いますが、普段のウエスタンで余裕で シグナルが出ないものは厳しいと思います。

(無題) 削除/引用 No.2332-6 - 2008/11/18 (火) 09:29:38 - EcoRI CBBではおそらく難しいでしょう 染色したゲルをブロットしたい、という目的ならば Zinc(Negative) Stainはいかがでしょう？ 多少テクニカルな部分もありますが、タンパク質が高感度(銀染色と同等といわれています)で検出でき、なおかつ脱色->ブロットも可能です。

(無題) 削除/引用 No.2332-5 - 2008/11/17 (月) 22:45:37 - はなこ ＞それとも、もう既にゲルをCBBで染めてしまっていて、その手持ちのCBB染色後のゲルを何かしらのの理由でどうしてもWBしたいということでしょうか？ 　そういうことです。トランスファー後のゲルをCBBで染めたりポンソーでメンブレンを染色することはこれまで何度もやっております。 　当初CBBのみの予定でしたが、急遽ウエスタンブロットも行うことになり、かつ貴重なサンプルなのでできればCBB染色したゲルを用いたいと考えています。

(無題) 削除/引用 No.2332-4 - 2008/11/16 (日) 12:03:51 - 名無し 出来れば実験の目的というかも書いた方が良いのでは？ おおさんも仰ってるようにトランスファー後で染色は出来る訳で。 トランスファー後にゲルはCBBヘ、メンブレンもポンソーなりで染められますし、又はWBで検出後にメンブレンもCBBへというのももちろん可能ですし（もちろん他の染色液でも）。 それとも、もう既にゲルをCBBで染めてしまっていて、その手持ちのCBB染色後のゲルを何かしらのの理由でどうしてもWBしたいということでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.2332-3 - 2008/11/16 (日) 08:21:18 - はなこ Coomasie染色後のゲルでウエスタンブロットをされてうまくバンドが検出されたご経験のある方はいらっしゃいますでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.2332-2 - 2008/11/15 (土) 04:49:28 - おお 不可能ではありません。 ただし、一度固定されているので、トランスファーの効率が 悪くなる可能性があります。できればそのほかの染色方法 か、トランスファーしてから膜を色素でそめて、その後 ウエスタンした方が、ウエスタンに関してはいいとおもいます.

Coomasie後のウエスタンブロット 削除/引用 No.2332-1 - 2008/11/15 (土) 04:41:00 - はなこ Coomasie染色後のゲル（トリスグリシンゲル）を使ってウエスタンブロットをすることって可能でしょうか？

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