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Elisaで困っています・・・ トピック削除
No.2331-TOPIC - 2008/11/15 (土) 00:23:08 - 実験初心者
現在、脾細胞をLPSで叩いて培養上清を回収し、生産されたサイトカイン(IFNg, TNFa, IL4)をelisaで定量する実験を行っています。
elisaのキットはPEPRO TEC ECのDevelopement kitを用いているのですが、なかなか安定したスタンダードカーブが得られません。

Elisaキットは3年前に購入したものらしく、古いのが原因なのかな？と自分なりには考えています。

そこでお聞きしたいのですが、Elisa等の抗体試薬の場合どれくらい冷蔵保存でもつのでしょうか？
またこうしたら安定したスタンダードカーブが得られるという、こつがあれば教えていただきたいと思います。
　
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有効期限の確認をされては？ 削除/引用
No.2331-12 - 2008/11/20 (木) 23:36:54 - YIKIO
既に回答がありますが、まずはEXPを確認するのが最初にすることでしょう。有効期限外でしたらちょっと...。
ELISAのプロトコールを確認したところ、固層を自分でやるタイプのようですね。
このタイプは数値にバラツキが出やすいので私は予め固層してあるキットを使用してます。
また、サイトカインはご承知のように培養条件と測定するｷｯﾄﾒｰｶｰ（ﾛｯﾄによっても）によって大きくデータが乖離する事があります。

それでは、実験が上手く行くようにお祈りしております。

(無題) 削除/引用
No.2331-11 - 2008/11/20 (木) 01:40:47 - おお
まさか、マウスに反応しないヒト用で、マウスのプロダクトでスタンダードとっているとか
ないでしょうね、、、、、、

たぶんないでしょうね。

(無題) 削除/引用
No.2331-10 - 2008/11/19 (水) 19:49:46 - 実験初心者
ご返信ありがとうございます。
新しいキットを買ってもらい、古いキットで練習したいと思います。

(無題) 削除/引用
No.2331-9 - 2008/11/15 (土) 23:37:15 - genji
ELISAキットのexpiration dateは1年くらいだと思いますが、封を開けていなければ、経験上2年は問題なく使えました。
安定したスタンダードカーブが得られないとのことですが、古いのが原因というよりもテクニカルな問題のように感じます。
とりあえず、キットが古いのでという理由で新しいキットを買っておいて、古いキットでもっと練習してみてはどうでしょうか。

写真つきでELISAのチェックポイントが書いてあるHPを紹介します。
http://www.jaica.com/8ohdg_elisa_procedure.html

(無題) 削除/引用
No.2331-8 - 2008/11/15 (土) 20:59:47 - ami
買いなおしましょう
それで問題が解決すれば安いもんです
たぶん解決すると思いますし

(無題) 削除/引用
No.2331-7 - 2008/11/15 (土) 20:30:25 - 実験初心者
返信ありがとうございます。
支持体はkitに指定されているnuncのelisaプレートを使用しているので大丈夫だと思います。elisaの種類はサンドウィッチです。
安定したスタンダードカーブが得られないっていうのは、きちんとした直線がひけず、個々のスタンダード濃度でのOD値にかなりばらつきがある感じです。
いちようスタンダードはOD値がでてるので完全にへたってはないと思うのですが、スタンダードの容器の底に沈殿物が見られたりと大丈夫なのかどうか
わからない感じです。

(無題) 削除/引用
No.2331-6 - 2008/11/15 (土) 10:30:07 - AP
支持体や抗原の結合法（サンドウィッチ?）はなんでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.2331-5 - 2008/11/15 (土) 10:27:03 - AP
>なかなか安定したスタンダードカーブが得られません。

具体的にはどういうことになるのでしょうか。
直線性がでない？　反復実験、side-by-sideのreplicateで結果が異なる？

買いなおしたほうが・・・ 削除/引用
No.2331-4 - 2008/11/15 (土) 09:30:27 - 7878
使用期限がキットに記載されているとおもいます。保存方法が適切な場合で大抵は半年から1年くらいと思います。
期限切れてすぐに全てがだめになることはないと思いますが、キットとしてのクオリティが保証されないので、その辺は自己責任になってくるかと。さすがに3年前のキットは使ったことがないですが。

(無題) 削除/引用
No.2331-3 - 2008/11/15 (土) 01:32:48 - おお
キットにポジコン(スタンダード)がついているのなら、それが
ダメになってるかも、、、、、

測定機器のは大丈夫ですか?

(無題) 削除/引用
No.2331-2 - 2008/11/15 (土) 01:08:47 - pou
ポジコンというか、そもそもキットについてるrecombinant cytokinesでのポジコンなど上手く行っています？

Elisaで困っています・・・ 削除/引用
No.2331-1 - 2008/11/15 (土) 00:23:08 - 実験初心者
現在、脾細胞をLPSで叩いて培養上清を回収し、生産されたサイトカイン(IFNg, TNFa, IL4)をelisaで定量する実験を行っています。
elisaのキットはPEPRO TEC ECのDevelopement kitを用いているのですが、なかなか安定したスタンダードカーブが得られません。

Elisaキットは3年前に購入したものらしく、古いのが原因なのかな？と自分なりには考えています。

そこでお聞きしたいのですが、Elisa等の抗体試薬の場合どれくらい冷蔵保存でもつのでしょうか？
またこうしたら安定したスタンダードカーブが得られるという、こつがあれば教えていただきたいと思います。
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