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(無題) 削除/引用 No.2307-4 - 2008/11/12 (水) 18:42:19 - あこ SDSの量が少なくてタンパク質がちゃんと変性してないのではと考え、SDSの量を増やしてみたところ問題なくサンプルが調整できました。聞けば教えてもらえると言う甘い姿勢でした。これからは自分で色々試した上で質問させていただこうと思います。失礼しました。

(無題) 削除/引用 No.2307-3 - 2008/11/12 (水) 18:03:47 - あこ ＞サンプルバッファーの問題と言い切れるでしょうか そういう観点で調べてみましょう。 返信ありがとうございます。今までのサンプルは菌をソニックで破砕してエッペンに移し遠心後、その上清をとったものです。今回のサンプルは菌を溶かすリン酸バッファーの量を少なくして得たものですからサンプルには問題ないと思います。又試薬に関しては全く同じ物を使っていますので試薬の問題でもないと思います。

(無題) 削除/引用 No.2307-2 - 2008/11/12 (水) 17:47:28 - ami [ヒント] サンプルバッファーの問題と言い切れるでしょうか そういう観点で調べてみましょう。

サンプルバッファーの組成について 削除/引用 No.2307-1 - 2008/11/12 (水) 17:18:32 - あこ SDS-PAGEで用いる2xSample Bufferの組成は、 １M‐Tris-HCl　　１ｍｌ １０％SDS　　　　１ｍｌ グリセロール　　　５ｍｌ BPB　　　　　　　０．１ｇ β-メルカプトエタノール　使用直前に添加 D.Wで５０ｍｌにメスアップ で使用していたのですが、今回濃度の濃いサンプルで調整して、ボイルした後いざアプライしようとしたところ、いつもと様子が違っていました。どう違っていたかと言うと ・水気がない（いつもはエッペンをひっくり返すとたれてくる） ・所々固まり？のようなものがある ・遠心しても集まらない ・壁面に固まりがくっついてしまっておりピペットで全部取りきれない といった様子でした。一度サンプルを水で二倍希釈して同様に調整したところいつも通り？でしたので恐らくサンプルの濃度が問題だと思います。しかし今回高濃度でPAGEを行いたいので2xSample Bufferの組成を変えたいと思うのですが、上記の組成ではどこが問題なのか教えていただけないでしょうか？ 又私達の研究室ではSample Bufferは常温放置なのですがネットなど見ますと冷蔵とかー２０℃で保存等あるのですがやはり常温放置はまずいのでしょうか？ 初心者なもので、どちらも初歩的な質問ですが、是非ご回答宜しくお願いたします。

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