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浮遊性細胞の安定発現株の作成について トピック削除
No.2298-TOPIC - 2008/11/11 (火) 16:04:54 - どーん
THP-1、HL-60、KG-1などの浮遊性細胞に遺伝子導入を行って安定発現する細胞を作りたいと考えております。
しかしリポフェクション、レトロウイルス、レンチウイルスなどをもちいていろいろ試みたのですが未だにうまく導入できません。

これらの細胞株で導入がうまくいった方がいらっしゃいましたら
御教授お願いします。
　
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(無題) 削除/引用
No.2298-6 - 2008/11/12 (水) 16:43:46 - MP
Selectionに使っている薬剤によっては、とれにくいこともあるかもしれないです。
G418なんかは死ぬのに時間はかかりますが、とりやすい印象があります。
逆にhygやpuroなどはとれにくかったりする細胞はいくつか経験したことがあります。
どんな薬剤をお使いでしょうか？

(無題) 削除/引用
No.2298-5 - 2008/11/12 (水) 10:32:33 - おお

発現させている遺伝子の影響では?
因みにトランジェントでは発現しますか?

誘導型プロモーターも考えた方がいいかもしれませんよ。

(無題) 削除/引用
No.2298-4 - 2008/11/11 (火) 21:58:24 - とう
MOLT-4ですが、electroporationで難なく採れましたよ。

レトロウイルスなどを使っても採れると思います。
実験系を、見直してみたら如何ですか？

(無題) 削除/引用
No.2298-3 - 2008/11/11 (火) 21:23:04 - jazzmessenger
BaF3ですが、Electroporationで入りました。

(無題) 削除/引用
No.2298-2 - 2008/11/11 (火) 19:25:12 - ~
HL60ならnucleofectorで入れたことがあります。
簡単に取れましたよ。

浮遊性細胞の安定発現株の作成について 削除/引用
No.2298-1 - 2008/11/11 (火) 16:04:54 - どーん
THP-1、HL-60、KG-1などの浮遊性細胞に遺伝子導入を行って安定発現する細胞を作りたいと考えております。
しかしリポフェクション、レトロウイルス、レンチウイルスなどをもちいていろいろ試みたのですが未だにうまく導入できません。

これらの細胞株で導入がうまくいった方がいらっしゃいましたら
御教授お願いします。
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