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私は洗いません 削除/引用 No.2297-3 - 2008/11/11 (火) 18:12:27 - Pumpkin PBSによる洗浄の影響を実験的に確かめたわけではないのですが、その状態のmRNA動態を見たいので培地を吸引後に速やかに処理しています。 茶さんは、薬物による反応を見られているので、処理の方法を常に一定化できていれば、どちらでも差がないように思えますが。処理の影響がないと思われるpositiveな結果が出ているのですから。 処理時間が短い場合には、影響が大きくなることが予想されるので、直ちにセルを溶解させた方がよいように思われます。

どっちもいます。 削除/引用 No.2297-2 - 2008/11/11 (火) 17:21:13 - mom-a PBSで洗っている人、洗わずにTRIZOLを入れる人、両方います。 洗う人の意見：培地中の血清のタンパクが入るのが嫌。 洗わない人の意見：なるべく早く処理したい、細胞が傷むのが嫌、細胞が剥がれると嫌、など。 タンパクのコンタミについては、TRIZOL精製で除去できれば問題ないかと思いますので、自分でやるなら洗わないかも…。 私は浮遊細胞でしかやっていないのですが、浮遊細胞の場合は、PBSでの洗浄はしない方がいいとマニュアルにありましたので、それに従っています。

細胞の経時的処理について 削除/引用 No.2297-1 - 2008/11/11 (火) 15:26:00 - 茶 細胞に薬剤等を時間ごとに加えてmRNAレベル（RT-PCRで）を調べる実験を行っています。ちなみに付着性細胞を使っています。 方法としては、RNAを抽出するTRIzolまたはISOGENを使っている のですが、その処理方法について最近気になる点があるので 教えてほしいのですが… 私の場合は、TRIzol処理する際にまず培地を除去しPBSをdishに注ぎ軽く 培地を洗ってからTRIzolをdishに流し込んでいます。 今のところ予想通りの結果が出ているのは良いのですが 培地を除去したらPBSで洗わず、すぐにTRIzolを流しこむほうが いいのではないかと思っています。 私の周りに似た実験を行っている人がいないため、どのやり方が スタンダードなのかも解りません。 もし、同じ様な実験をしている人がいれば教えてもらえないでしょうか？ また、私は最短で1hから3h程度の処理ですが、もっと短い処理 例えば数分から数十分の処理で反応を見ている人はどのように サンプルを得ているのでしょうか？その点についても宜しくお願いします。

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