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DNA-DNA相同性実験 トピック削除
No.229-TOPIC - 2007/09/21 (金) 18:57:05 - HYBRI
微生物の同定を行う目的で、DNA-DNA相同性実験を行っています。

常法に従い、マイクロプレートへのDNAの固定、フォトビオチンによるプローブDNAの標識、ハイブリダイゼーション、ストレプトアビジンの結合、発色(TMB)で行っていますが、全く発色しません。

マイクロプレートへの固定条件(固定温度、プレートの種類)、フォトビオチン化の条件(時間、光源)、ハイブリの条件(温度、時間)などを文献を基に変えてみましたが、効果がありませんでした。

何でも良いのでお気づきの点がありましたら、アドバイスを頂ければ幸いです。
 
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ポジコン 削除/引用
No.229-3 - 2007/09/21 (金) 20:56:17 - HYBRI
ポジコンとネガコンも作製し、検討しています。
ホジコンではプローブに用いた株と同じ株のDNAを、
ネガコンでは牛胸腺DNAを用いています。
ホジコンでも発色認められません・・・。

(無題) 削除/引用
No.229-2 - 2007/09/21 (金) 19:20:48 - a
ポジコンを作製し検討していますか?
もし、入っているのであればどのようなものですか?

DNA-DNA相同性実験 削除/引用
No.229-1 - 2007/09/21 (金) 18:57:05 - HYBRI
微生物の同定を行う目的で、DNA-DNA相同性実験を行っています。

常法に従い、マイクロプレートへのDNAの固定、フォトビオチンによるプローブDNAの標識、ハイブリダイゼーション、ストレプトアビジンの結合、発色(TMB)で行っていますが、全く発色しません。

マイクロプレートへの固定条件(固定温度、プレートの種類)、フォトビオチン化の条件(時間、光源)、ハイブリの条件(温度、時間)などを文献を基に変えてみましたが、効果がありませんでした。

何でも良いのでお気づきの点がありましたら、アドバイスを頂ければ幸いです。

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