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ProteinGカラムによる抗体の精製 トピック削除
No.2285-TOPIC - 2008/11/10 (月) 17:53:56 - みやび
ハイブリドーマの上清から抗体(マウスIgG1)を精製している者です。
ProteinGカラム(1ml)で精製し、0.1MグリシンHCl(pH3.0)で溶出させ、
溶出画分をSDS-PAGEで確認しました。
その結果、非還元条件で150-80kDaくらいの間に3本の強いバンドと、50kDa-1本と25kDa-1本の薄いバンドが確認できました。還元状態では50kDaと25kDa付近にそれぞれ1本ずつ強いバンドが確認できました。
150kDa付近の3本の強いバンドは、精製前のサンプルにも含まれていて、カラム精製後もそのまま残っており、Through画分にはありません。これは、抗体(150kDa)の一部が酵素などで既に分解されていると考えていいのでしょうか?抗体によるFACS解析をした処、抗体の機能は保持しているようですが。。。
 
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(無題) 削除/引用
No.2285-3 - 2008/11/10 (月) 21:06:44 - みやび
> ハイブリドーマの培養上清に含まれるウマ血清由来という訳ではないですか?

う-nさん、貴重なご指摘ありがとうございます。
今回は、無血清培地で培養しましたので、購入した培地自体にウマ血清が混入してない限りは、大丈夫だと思います。
他にコンタミの可能性がなかったかを検討してみます。

(無題) 削除/引用
No.2285-2 - 2008/11/10 (月) 18:07:17 - う-n
ハイブリドーマの培養上清に含まれるウマ血清由来という訳ではないですか?

ProteinGカラムによる抗体の精製 削除/引用
No.2285-1 - 2008/11/10 (月) 17:53:56 - みやび
ハイブリドーマの上清から抗体(マウスIgG1)を精製している者です。
ProteinGカラム(1ml)で精製し、0.1MグリシンHCl(pH3.0)で溶出させ、
溶出画分をSDS-PAGEで確認しました。
その結果、非還元条件で150-80kDaくらいの間に3本の強いバンドと、50kDa-1本と25kDa-1本の薄いバンドが確認できました。還元状態では50kDaと25kDa付近にそれぞれ1本ずつ強いバンドが確認できました。
150kDa付近の3本の強いバンドは、精製前のサンプルにも含まれていて、カラム精製後もそのまま残っており、Through画分にはありません。これは、抗体(150kDa)の一部が酵素などで既に分解されていると考えていいのでしょうか?抗体によるFACS解析をした処、抗体の機能は保持しているようですが。。。

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