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(無題) 削除/引用 No.2232-6 - 2008/11/07 (金) 13:48:29 - おお ファーウエスタンはあまり一般的ではなく(だからといって認められていないと言う事はないですが) うまく行くかどうかはタンパクによって違いますし必ずしもこれを適用しないといけないわけでも ありませんので、考慮に入れる程度でいいとおもいます。 プルダウン中心に考えた方が実験を組み立てやすいと思います。あるいは指摘があるように コンプレックスとして精製するか(プルダウンも基本的にコンプレックス精製ですが)ですね。 単純にプルダウンだけで済ますとマスに持っていくにはクル-ド過ぎる場合も可也ありますので そのへんをどうするかを考える必要があるかもしれませんね。

(無題) 削除/引用 No.2232-5 - 2008/11/07 (金) 13:24:56 - kor 数々のご回答ありがとうございました。ファーウエスタンはまだ経験していない手法なので、ラボが許してくれればの話ですが…ぜひ試してみたいと思います。

(無題) 削除/引用 No.2232-4 - 2008/11/05 (水) 19:34:51 - よっしー もし，何らかの方法でタンパク同士の複合体が取れるのであれば， blue native PAGEで泳動後，SDS-PAGEで2次元に展開すると見れるかもしれませんね．その後は，マスでも何でも可能でしょう．多少クルードでも問題ないと思うのですが．そんなことを聞かれているのではないのかな？？？

(無題) 削除/引用 No.2232-3 - 2008/11/05 (水) 18:00:16 - おお マスの精度が上がってきてプルダウン、マススペックという方法が取りやすくなってきましたね。でも感度よすぎと言う事もあるみたいなので、実験を組み立てる時配慮が必要です。 量取れるなら、精製過程を慎重にやり、候補がCBBで見れるぐらいにして、そこを切り出す位のほうが確実かと思います。そういう意味で動物の臓器を使うことがありますね。牛の肝臓とか、、、 相互作用を示す生化学的手法は幾らかあるので、それを組み合わせていってと言うのが現実的だと思います。ファーウエスタンが可能なら直接的な結合相手のサイズは見積もれると思いますし、クロスリンクを利用した方法は細胞膜にある増殖因子などのリセプターの同定でよく使われてきました。 クロマチンのスペーシングに携わる複合体はある患者の血清の抗体の反応を指標にゲル濾過のカラムで巨大なタンパク複合体として取れてくるものを解析して解明されたというのもあります。 スクリーニングであればY2Hは一つの方法ですがファーウエスタンが可能ならファージなどを利用した発現クローニングなどもできるかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.2232-2 - 2008/11/04 (火) 17:40:28 - ~ Two-hybridは一般的な方法でしょうね。 共沈、ファーウエスタン、プルダウンなどが思いつきました。 手持ちの材料や、結合する相方の候補の範囲などで選んでいったらいいかと思います。 wikipediaでももっと書かれていますね。 http://ja.wikipedia.org/wiki/%E3%82%BF%E3%83%B3%E3%83%91%E3%82%AF%E8%B3%AA%E9%96%93%E7%9B%B8%E4%BA%92%E4%BD%9C%E7%94%A8

タンパク質同士の作用を見るには？ 削除/引用 No.2232-1 - 2008/11/04 (火) 16:58:15 - kor 今、あるタンパク質に結合するタンパク質が不明で、それを突き止めたいと思っています。そこでどういう方法を使うのが一般的でしょうか？やはり、two-hybridが一般的な方法でしょうか？

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