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ISOGENでの3層分離の失敗について。 トピック削除
No.2179-TOPIC - 2008/10/24 (金) 15:58:12 - Qulala
現在、ISOGENを用いたRNA抽出を行っています。
サンプルはRNAlater処理をしたマウス肝臓片です。
プロトコル通りの方法でサンプルにISOGENを加え、
ディスポのホモジナイザー(棒状のもの)でホモジナイズし、
クロロホルムを添加したのですが、水層、中間層、有機層のうち、
水層がほとんど見られす、しかも濁っています。
この原因について、どなたかお知恵を貸して頂けますよう
お願い致します。
 
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ありがとうございます。 削除/引用
No.2179-4 - 2008/10/29 (水) 12:32:00 - Qulala
今回はクロロホルムを追加して遠心し、水層を分取することが出来ました。
確かに、肝臓とISOGENの混合溶液は粘性が高く、ISOGEN量が足りていない
印象があります。サンプル量が多すぎだったようなので、今度はその点にも注意したいと思います。
ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.2179-3 - 2008/10/24 (金) 17:36:20 - あかね
クロロホルムをもう少し加えてみてください。

(無題) 削除/引用
No.2179-2 - 2008/10/24 (金) 17:27:00 - AP
液量が足りなかったのかなというのが第一印象です。

高分子DNAや、肝臓だと特にグリコゲンが多く、あまり濃度が濃いと水層が粘稠になったり、ゼリー状に固まってしまうことすらあります。まず、ISOGENを増やしては。DNAを破砕する処理(注射針を通すとか)を加えて粘性を下げる操作を入れたほうがいいかも。

ISOGENでの3層分離の失敗について。 削除/引用
No.2179-1 - 2008/10/24 (金) 15:58:12 - Qulala
現在、ISOGENを用いたRNA抽出を行っています。
サンプルはRNAlater処理をしたマウス肝臓片です。
プロトコル通りの方法でサンプルにISOGENを加え、
ディスポのホモジナイザー(棒状のもの)でホモジナイズし、
クロロホルムを添加したのですが、水層、中間層、有機層のうち、
水層がほとんど見られす、しかも濁っています。
この原因について、どなたかお知恵を貸して頂けますよう
お願い致します。

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