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(無題) 削除/引用 No.217-5 - 2007/09/21 (金) 12:01:04 - #5 貴重なご意見ありがとうございます。 ひとまずやってみて、問題があるようでしたら内側のプライマーで行ってみます。 ゲルからの抽出も考えたのですが、結構多くのサンプルを処理しますので今回は内側のプライマーを使用する方法でおこなってみます。 どうもありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.217-4 - 2007/09/21 (金) 10:31:22 - seqman PCRに使ったプライマーより内側の配列に相当する別のプライマーでシークエンスするなら問題ないでしょう。 PCRと同じプライマーでシークエンスする場合には、エキストラバンドの量が少なくとも一概に言えないと思います。

(無題) 削除/引用 No.217-3 - 2007/09/20 (木) 12:54:25 - PCR ゲル抽出を行ってはどうですか？

(無題) 削除/引用 No.217-2 - 2007/09/20 (木) 11:37:32 - ~ アガロースゲルではシングルバンドでも、 PAGEではエキストラバンドが複数見えるというPCR産物でダイレクトシーケンスをしたことがあります。 エキストラバンドの比率次第としか言いようがありませんので、 試してみないとなんともいえません。

ダイレクトシークエンスにおけるエクストラバンド 削除/引用 No.217-1 - 2007/09/20 (木) 11:14:38 - #5 初歩的な質問で申し訳ありません。 ダイレクトシークエンスを初めて行います。 電気泳動においてシングルバンドを得ることが出来ないと、当然ダイレクトシークエンスは出来ないかと思います。しかし、私はいま、ＰＣＲ産物を泳動したときに別の位置にほんの少しエキストラバンドが見えます。ＰＣＲ産物を１０倍程度に希釈するとエキストラバンドは見られなくなる程度です。 原理から考えるとそれくらいは無視しても大丈夫かなとも思うのですが実際に系を動かしたことがないので、、、。 わずかなエキストラバンドでもダイレクトシークエンスを行う際に問題があるかを教えてください。

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