全4件 ( 1 〜 4 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.2167-4 - 2008/10/23 (木) 19:21:22 - 大学院生 下っ端様 ご返信ありがとうございました 今後はホスファターゼ阻害剤を添加させようと思います

(無題) 削除/引用 No.2167-3 - 2008/10/23 (木) 10:46:03 - 下っ端 また、リン酸化抗体を使うときはブロッキングにスキムミルクを使うことは避けた方が無難でしょう。お使いの抗体のマニュアルにはスキムミルクを使うように書いてありますか？

(無題) 削除/引用 No.2167-2 - 2008/10/23 (木) 10:40:38 - 下っ端 リン酸化を検出するなら、ホスファターゼ阻害剤を入れるのは当然です。 また、ご覧になっているデータがおかしくて、ERKとJNKが高レベルにリン酸化されているはずと信じる確たる理由がおありなのでしょうか。

脱リン酸化酵素阻害剤について 削除/引用 No.2167-1 - 2008/10/23 (木) 10:28:38 - 大学院生 マウス心臓をホモジェナイズし抽出した蛋白を用いて、 抗リン酸化抗体(phospho-ERK1/2, phospho-JNK, phospho-p38)の、ウエスタンブロットを行っていますが、JNKとERKのバンドがうまく検出されません。 p38はきれいに検出されるものの、ERKはERK2のみかろうじて検出され、JNKは非常に薄いバンドしかでません。 蛋白のアプライ量は50μg ブロッキングは5％スキムミルク　室温60分 一時抗体はプロメガのantiMAPKシリーズの製品を使用し、４℃　o/N としています。 ２次抗体はrabittのHRP、シグナル検出はsuper signal(ピアース)を使用しています ブロッキング液として、スキムミルクの変わりに、ブロックワンPを使用しても結果は変わりませんでした。 最初に組織をホモジェナイズする際に脱リン酸化酵素を添加するとよい ということを何かで聞いたのですが、本当でしょうか？ ご存知の方がいらっしゃいましたらご教授よろしくお願いいたします

全4件 ( 1 〜 4 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

---