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ヒストンとタンパクの相互作用を調べたい
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No.216-TOPIC - 2007/09/20 (木) 08:16:34 -
ばたこ
いつもここの掲示板に来てはいろいろトピックを見ています。
参考になることも多く、勉強になります。
今日は皆様にお尋ねしたいことがあって初投稿です。
4種類のコアヒストンタンパクに、あるタンパク質Xが結合しているかどうか
調べたいのです。
どのような実験方法が考えられますでしょうか?
生化学はじめて半年、壁にぶちあたっています…。
本や論文で調べるとプルダウンアッセイとか書いてあるのですが
やはりこの方法が一番良いのでしょうか?
ご回答お待ちしております。
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ありがとうございます
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No.216-3 - 2007/09/20 (木) 14:23:30 - ばたこ
ご回答ありがとうございます。
では流れとしては
ヒストンとの相互作用が見たいタンパク(タグつき)を発現した
細胞を破砕→核抽出→クロマチン画分抽出→ヒストン画分抽出をしたら
アフィニティー精製、IP、WB
という感じで進めていけば大丈夫でしょうか?
(無題)
削除/引用
No.216-2 - 2007/09/20 (木) 09:06:00 - ~
IP
SPR
FRET
金コロイド標識抗体を使った電子顕微鏡観察
蛍光抗体を使った共焦点レーザー顕微鏡観察
下に行くほど、直接的な結合ではなく、共局在を見ることになります。
ヒストンとタンパクの相互作用を調べたい
削除/引用
No.216-1 - 2007/09/20 (木) 08:16:34 -
ばたこ
いつもここの掲示板に来てはいろいろトピックを見ています。
参考になることも多く、勉強になります。
今日は皆様にお尋ねしたいことがあって初投稿です。
4種類のコアヒストンタンパクに、あるタンパク質Xが結合しているかどうか
調べたいのです。
どのような実験方法が考えられますでしょうか?
生化学はじめて半年、壁にぶちあたっています…。
本や論文で調べるとプルダウンアッセイとか書いてあるのですが
やはりこの方法が一番良いのでしょうか?
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