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(無題) 削除/引用 No.2144-7 - 2008/10/21 (火) 01:54:01 - あべちゃん > 以前DMEM-low glucoseにhigh glucoseと同様のグルコース濃度になるようにグルコースを添加して培養してみたことがあるのですが、 low glucose 用のsodium bicarbonateや　あるいはhepesはどの程度入っていましたか？ あと、細胞が死滅したとき、フェノールレッドの色はどのような色でしたか？ 真っ黄色だったんじゃなかと想像しました。

(無題) 削除/引用 No.2144-6 - 2008/10/20 (月) 23:39:39 - ~ DMEMではありませんが、培地に必要な濃度のグルコースを添加して使用しています。 >以前DMEM-low glucoseにhigh glucoseと同様のグルコース濃度になるようにグルコースを添加して培養してみたことがあるのですが、細胞が死滅し培養できませんでした。 それは、培地以外に原因があったかと思います。 または、あまりに純度が低いグルコースで、細胞毒性があったとかありませんか？ 乳酸をたくさん出す細胞では、高いグルコース濃度ではもともと飼えない細胞もいますが、市販のHigh-glucoseのDMEMでは飼えるのですか？ ところで、グルコースはいつ添加しましたか？ オートクレーブ前に添加したのであれば、 メイラード反応で何か出来たのかもしれません。 別に100~200g/Lくらいのグルコース溶液をオートクレーブしておいて、 オートクレーブ後に混ぜれば問題ないはずです。 出来ればろ過滅菌の方が安心ですけどね。

(無題) 削除/引用 No.2144-5 - 2008/10/20 (月) 23:38:42 - おお >[Re:4] sionさんは書きました : > 早速の返信ありがとうございます。 > > 説明不測で申し訳ありません。 > 以前DMEM-low glucoseにhigh glucoseと同様のグルコース濃度になるようにグルコースを添加して培養してみたことがあるのですが、細胞が死滅し培養できませんでした。 L-glucoseとか使ってるのでしょうか、、、 あとは、使った試薬が微量の培養に適さない物質が含まれている可能性もあるかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.2144-4 - 2008/10/20 (月) 23:13:16 - sion 早速の返信ありがとうございます。 説明不測で申し訳ありません。 以前DMEM-low glucoseにhigh glucoseと同様のグルコース濃度になるようにグルコースを添加して培養してみたことがあるのですが、細胞が死滅し培養できませんでした。実際にその時の培地を回収しグルコース濃度を定量してみたところ、high glucoseと同程度の濃度だったのですが。添加する際は粉末のグルコースを滅菌水に溶解し、フィルター濾過して用いました。用いている細胞は通常high glucoseで培養されているもので、何が原因なのかわからない状態です。

え？ 削除/引用 No.2144-3 - 2008/10/20 (月) 22:43:32 - TS >単純に粉末のグルコースを添加しただけでは、うまくいかなかったのですが… この意味がわかりませんが。どういうことですか？ 作れない？実験がWorkしない？

(無題) 削除/引用 No.2144-2 - 2008/10/20 (月) 22:32:36 - おお >[Re:1] sionさんは書きました : > 現在、DMEM-high glucoseを用いて培養を行っているのですが、さらに高濃度のグルコースを含む培地での培養を考えています。 > 単純に粉末のグルコースを添加しただけでは、うまくいかなかったのですが…。 いや、加えたいなら単純に添加すればいいと思うのですが、、 20-100xの濃度の液を予め作り、フィルターで滅菌して加えるといいと思いますが。 濃い液がつくれないなら、粉末のバイチをかって、必要量グルコースを加えフィルターするといいと思います。

高グルコース培地の調整 削除/引用 No.2144-1 - 2008/10/20 (月) 21:37:25 - sion 現在、DMEM-high glucoseを用いて培養を行っているのですが、さらに高濃度のグルコースを含む培地での培養を考えています。 単純に粉末のグルコースを添加しただけでは、うまくいかなかったのですが…。 培地の調整方法に関して何かアドバイスを頂けたらと思い、投稿させて頂きました。 十分な知識がなく素人質問で申し訳ないのですが、よろしくお願いします。

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