BioTechnicalフォーラム [プロテインA結合後の抗体のアフィニティー]

プロテインA結合後の抗体のアフィニティー

No.2136-TOPIC - 2008/10/17 (金) 20:35:12 - ニノ

抗体(マウスIgG)をプロテインAビーズ上に固定化し、
抗原を捕獲するという実験を行っています。

ふと疑問に思ったのですが、
抗体の抗原に対するアフィニティーは、
プロテインAに結合した状態とフリーの状態の
どちらでも同じなのでしょうか？

プロテインAは抗体のFc領域に結合するため、
Fab領域にある抗原結合部位には影響しないように思うのですが、
いろいろ文献をあたっても、そのような比較を行っている論文は
今のところ見つかっておりません。

どなたかご存知でしたらご教示下さい。
よろしくお願いいたします。
　

- このトピックにメッセージを投稿する -

全9件 ( 1 ～ 9 )　前 | 次　1/ 1. /1

(無題)

削除/引用

No.2136-9 - 2008/10/21 (火) 07:05:58 - 名無し

時間をかけて本腰入れて調べれば、影響を受ける抗体が見つかる可能性は否定できませんが、あくまで一般論として考えると、これまでprotein Aに結合させて問題が生じた経験はありませんし、聞いた事もありません。そういうことが起こる懸念があるならば、本法が確立した方法としてこれほど長い間多くの研究者に利用され、広く普及する事はなかったでしょう。おそらくあなたの実験の目的からみても今貴重な時間を割く必要のあるような本質的な事柄ではないように感じます。先生のいうような可能性を検証するにはかなりの時間を費やす事、またそれは本来のテーマの進行にも影響しかねないことを説明して、自分のよいと考える方向に研究を進めていくほうが賢明と思います。

(無題)

削除/引用

No.2136-8 - 2008/10/21 (火) 00:13:21 - ami

論文出たら教えてください。読みたいです。

http://

削除/引用

No.2136-7 - 2008/10/20 (月) 23:58:42 - TK-1

そんなボスについているとはお気の毒ですね。そんなことを論文に書いたところで、特殊な場合以外、論文の質が変わるとは思いませんが。きっと特殊な実験をされているのでしょう。

もしやりたければ、
（１）抗体をbeadsに吸着させてからIP
（２）抗体と抗原を結合させてから最後に１時間程度beadswp加えてcomplexを回収する

というものを比較すれば済むことだと思いますが。

>[Re:6] ニノさんは書きました :
> むむ様、ami様
>
> コメントありがとうございます。
>
> この件についてボスと話してみたのですが、
> 「protein Aがついても抗体のアフィニティーは変化しない」ことを
> ボスが執筆中の別の論文に、文献を挙げて記述したいそうです。
>
> 私の実験にも関連することだからきちんと調べるように
> 依頼されてしまいました(やぶへび)。
>
> 引き続き文献を探してみるつもりですが、
> なにか役に立ちそうな情報があれば教えてください。

(無題)

削除/引用

No.2136-6 - 2008/10/20 (月) 16:26:42 - ニノ

むむ様、ami様

コメントありがとうございます。

この件についてボスと話してみたのですが、
「protein Aがついても抗体のアフィニティーは変化しない」ことを
ボスが執筆中の別の論文に、文献を挙げて記述したいそうです。

私の実験にも関連することだからきちんと調べるように
依頼されてしまいました(やぶへび)。

引き続き文献を探してみるつもりですが、
なにか役に立ちそうな情報があれば教えてください。

(無題)

削除/引用

No.2136-5 - 2008/10/18 (土) 19:02:11 - ami

そんなこと気にして免疫沈降やってる論文ないですよね・・・

(無題)

削除/引用

No.2136-4 - 2008/10/18 (土) 18:25:53 - むむ

アロステリックな調節を想定する理由もないので、私には自明に思えますが。文献と言われても難しいでしょうね。ボスはそれでは納得しないのですか？

(無題)

削除/引用

No.2136-3 - 2008/10/18 (土) 14:38:26 - ニノ

うーん様

ご意見ありがとうございました。

この件についてボスに説明するよう求められているのですが、
適当な参考文献をご存知でしたら教えて下さい。