全6件 ( 1 〜 6 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.213-6 - 2007/09/23 (日) 21:14:17 - ats 1M batain (Stock 5M in DDW)を添加してみてはいかがでしょうか。 昔市販されていたperfectmatchの主成分だそうです。mismatch anealを減らす効果があります。 ただし、primerによっては増幅効率が低くなることがあります。

(無題) 削除/引用 No.213-5 - 2007/09/22 (土) 21:06:03 - RR PCRの熱変性の時間を延ばしたり、98℃くらいまで上げてみてはどうですかね？

(無題) 削除/引用 No.213-4 - 2007/09/22 (土) 19:27:17 - くまねこ PCRさん、h-izさん返信ありがとうございます。 まだ解決はしていないんですが、実験は続けていて、 テンプレートなしのネガコンでもスメアになる。 それはポリメラーゼを変えても起こることから、 プライマーに原因があると考えられました。 ただ、プライマーを買いなおしても解決しないので、 配列等を少しいじらないといけないかと考えているところです。

(無題) 削除/引用 No.213-3 - 2007/09/19 (水) 15:10:26 - h-iz 私も同様の経験が。 私の場合、プライマーやcDNAの劣化が原因でした。

(無題) 削除/引用 No.213-2 - 2007/09/19 (水) 14:44:46 - PCR 私も以前同じ経験があります。 原因については分かりません。ごめんなさい。 確かアニーリング温度・Volume・Cycle数を変えたりして問題は回避できたと思います。 ポリメラーゼを変えてみるのもいいかも知れません。 参考までに。

同じ条件でのRT-PCRでスメア 削除/引用 No.213-1 - 2007/09/19 (水) 14:37:02 - くまねこ いつも勉強させていただいてます。 RT-PCRで依然はシングルバンドだったにもかかわらず、 同じ条件でPCRしているのに、スメアになり、増えなくなってしまいました。 詳しい症状としては、コームの部分が強く光り、そこから下に伸びるスメアになって白くなってしまいます。 何故このようなことが起こるのか、またその改善方法についてご教授いただけませんでしょうか？ アドバイスいただきたく思います。よろしくお願いします。 以下条件です。 PCRのキット：clontechのAdvantage 2 PCR kit サイクル数：40サイクル（25〜30でも同じ症状、20だと何もなくなる） ゲルは1.5％でやっていましたが、0.5％でも同じ症状。マーカーはきちんと流れている。 他の遺伝子や目的遺伝子の他の部分は増える。 Templateの作り直しや、Primerの買い替え、試薬についても変えたが同じ症状。 Primerはその部分を増やしたいので、配列を大幅に変えることができない。

全6件 ( 1 〜 6 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

---