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(無題) 削除/引用 No.2104-4 - 2008/10/15 (水) 10:31:41 - ~ >前の人が行った時も同様の事態になっていましたので 前の人も同じバキュロウイルスベクターを使ったのですよね。 >HEK293などでは蛋白自体は発現しますので これは別のベクターでの発現でしょうか？ そうであれば、まずは手持ちのバキュロウイルスベクターの配列を疑うべきだと思いますが。 293で発現するのであれば、293で作らせてはいかがでしょうか？ すでに、293で発現するベクターをお持ちなのですよね。 必要量にもよりますが、Sf9でいろいろ検討するよりも、力技のほうが早いかと思います。

(無題) 削除/引用 No.2104-3 - 2008/10/15 (水) 02:56:17 - mm インタラクター無しでは不安定なタンパク質はたくさんあると思います。 もし相互作用する因子が分かってるのでしたら、それと共発現させると うまくいく可能性はあると思います。私は以前レセプターを扱っていましたが リガンド非存在下では全く可溶性のタンパク質を得ることはできなかったの ですが、リガンド混入下で無事精製できました（共発現ではありません）。 参考まで。

(無題) 削除/引用 No.2104-2 - 2008/10/15 (水) 02:40:22 - Baculo初心者 lysateを抗体でWesternしましたが、全く発現していませんでした。 前の人が行った時も同様の事態になっていましたので、手技的なミスではないと思います。 また、HEK293などでは蛋白自体は発現しますので、それほど毒性などが強いわけでもない気がしています。

蛋白がBaculoで発現しません 削除/引用 No.2104-1 - 2008/10/11 (土) 23:36:03 - Baculo初心者 Baculo virusを用いて、recombinant蛋白を精製しようとしています。 2種類行っており、共にサイズは150kDa程度です。 片方は、10cm dish 1枚から5ug程度とれるのですが、もう片方は全くとれません。ただ、Sf9の増殖が止まるので、virus自体はいるようです。 このような場合、どのような対処法が考えられますでしょうか？ よろしくお願いいたします。

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