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培養細胞中のインスリン測定について トピック削除
No.2103-TOPIC - 2008/10/11 (土) 15:09:06 - ELISA初心者
初めまして.
いつも勉強させて頂いております.
初代培養肝細胞に転写因子(Pdx1)を異所性発現させ,インスリン再生細胞への分化転換を図る実験を始めようとしているものです.
過去の報告ではELISAに用いるサンプルの調整に酸・エタノール溶液を用いているものを多く認めますが,この細胞溶解液をRIPAバッファーなどで行うと何か影響があるのでしょうか?
御存じの方がいらっしゃいましたら,ご教示頂ければ幸いです.
 
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(無題) 削除/引用
No.2103-3 - 2008/10/11 (土) 20:56:10 - ELISA初心者
ご返信ありがとうございます.
酸エタノール溶液で処理するのは,インスリンが何かのタンパク質と結合している場合,その結合を解離させるためだと理解しています.
RIPAバッファーにはそのような作用が無いと考えるべきなのでしょうか?
使用を検討しているキット(シバヤギ社)の参考文献の中には,RIPAバッファーを使用している論文もあったので,そこが分かりませんでした.
宜しくお願いいたします.

(無題) 削除/引用
No.2103-2 - 2008/10/11 (土) 19:44:18 - ami
あなたはどう考えているのかが分かると答えやすいです。

培養細胞中のインスリン測定について 削除/引用
No.2103-1 - 2008/10/11 (土) 15:09:06 - ELISA初心者
初めまして.
いつも勉強させて頂いております.
初代培養肝細胞に転写因子(Pdx1)を異所性発現させ,インスリン再生細胞への分化転換を図る実験を始めようとしているものです.
過去の報告ではELISAに用いるサンプルの調整に酸・エタノール溶液を用いているものを多く認めますが,この細胞溶解液をRIPAバッファーなどで行うと何か影響があるのでしょうか?
御存じの方がいらっしゃいましたら,ご教示頂ければ幸いです.

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